Evaluación de la Actividad Antioxidante de los Flavonoides Presentes en las hojas de Polimnia lehmanii “Llareta”

UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA” DE ICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

I.- GENERALIDADES.

1.- Título.

“Evaluación de la Actividad Antioxidante de los Flavonoides Presentes en las hojas de Polimnia lehmanii “Llareta”

2.- Personal Investigador.

2.1.- Autores

- Chacaltana Uribe, Paola Gabriela

- Vásquez Massa , Johanna Greseel

Egresadas de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” de Ica.

2.2.- Asesoras

- Dra. Haydée Chávez Orellana

Profesora Principal a D.E

- Mag. Aura Molina Cabrera

Profesora Principal a D.E

3. Tipo de Investigación: Experimental

Experimental.

4.- Régimen de Investigación.

Libre.

5.- Lugar donde se realiza el trabajo.

 Laboratorio de Química Orgánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNSLG.

 Laboratorio de Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNSLG.

6.- Institución donde se realiza el proyecto.

Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” de Ica.

7.- Departamentos Académicos y sección a la que pertenece el proyecto.

 Departamento de Química Farmacéutica.

 Departamento de Ciencias Farmacéuticas.

8.- Duración total del Proyecto.

Mayo – Noviembre 2010

9.- Etapas y cronograma.

9.1.- Etapas

A) Revisión Bibliográfica (durante toda la ejecución del Proyecto).

B) Recolección, Clasificación, selección y preparación del material vegetal

C) Obtención del extracto etanólico , fraccionamiento del mismo con solventes de diferente polaridad éter de petróleo, diclorometano , acetato de etilo y metanol por “Columna rápida

D) Evaluación de la Actividad Antioxidante en los diferentes extractos por el método de DPPH y determinación de los extractos más activos

E) Fraccionamiento cromatográfico para aislar los flavonoides presentes en el o los extractos más activos

F) Elucidación estructural mediante técnicas espectroscópicas Ir, UV/Vis, espectrometría de resonancia magnética nuclear de protón 1H y carbono 13C.

G) Evaluación de la actividad antioxidante de los flavonoides aislados

H) Elaboración del informe final

9.2.- Cronograma

ETAPAS

MAYO

JUNIO

JULIO

AGOSTO

SETIEMBRE

OCTUBRE

NOVIEMBRE

A X X X X X X X

B X

C X X

D X

E X

F X X

G X

H X

10.- Recursos disponibles.

10.1.- Personal de apoyo.

Miembros de Asociación Científica de Investigación Farmacéutica. ACIF

Personal técnico de los laboratorios.

10.2.- Locales.

 Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNMSM.

 Biblioteca Central de la UNSLG.

 Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNSLG.

 Laboratorio de Química Orgánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNSLG.

 Laboratorio de Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNSLG.

10.3.- Materiales y Equipos.

Materiales de Laboratorio

- Peras de bromo

- Fiolas

- Micropipetas de 50, 100,500 y 1000 L

- Pipetas volumétricas

- Pipetas pasteur

- Probetas

- Viales

- Matraces erlenmeyer

- Balones

- Agitadores de vidrio

- Vasos de precipitado

- Tubos de ensayo

- Pinzas para tubos de ensayo

- Gradillas

- Pinzas de metal

- Espátulas de metal

- Vasos de vidrio

- Columna de destilación

- Embudos

- Luna de reloj

- Papel de filtro

- Papel de aluminio

- Soporte universal

- Aro de soporte

- Pinzas clamps

- Equipo de disección

- Guantes

- Mascarillas

• Material Biológico.

Flavonoides

• Material Cromatográfico.

Sephadex LH-20 Casa PHARMACIA FINE CHEMICALS.

Cromatofolios de la casa SCHLEICHER & SCHUEL, tipo G1510/LS 254.

Placas de tipo HPTLC 60-200 de o.2 mm de espesor de la casa PANREAC

Silicagel G-60 , 0.063-0.200 mm de diámetro de la casa Merck.

• Equipos

- Balanza analítica

- Estufa

- Evaporador rotario

- Espectrofotómetro UV-Visible UNICO-2001

- Espectrómetro Bruker Avance 300 (300 MHz).

• Reactivos

Etanol

2,2-Difenil-1-picrilhidraizil (DPPH)

Ácido ascórbico

Éter de petróleo

Diclorometano

Acetato de etilo

Metanol

Cloroformo

Piridina deuterada

Cloroformo deuterado

Metanol deuterado

11. Presupuesto

11.1 Bienes

Bienes.

A. MATERIAL DE VIDRIO Y EQUIPOS (S/.)

Micropipetas 1,000.00

B. MATERIAL BIOLÓGICO (S/.)

10 Kg de hojas de Polimnia lehmanii “llareta” 250.00

C. REACTIVOS

1 Fco 2 ,2-Difenil-1-picrilhidraizil (DPPH)X100mg 100.00

2 fco. Cloroformo Q.P. x 1.5 lt. 200.00

5 fco Etanol Q.P x 2.5 lt 300.00

1 fco. Éter de petróleo industrial x 4 lt. 200.00

2 fco. de Diclorometano industrial x 2 lt. 250.00

2 fco. de Acetato de etilo x 4 lt 700.00

1 caja de cromatofolios silcagel G60 300.00

2 Kg de silicagel G 60 200.00

D. MATERIALES DE ESCRITORIO (S/.)

3 Papel bond A-4 x 1 millar 75.00

2 Cartucho de tinta Blanco/negro 100.00

2 Cartucho de tinta color 150.00

1 Caja de diskette x 10 Unid. 8.00

3 CD em Blanco regrabables 12.00

Correctores líquidos, lapiceros, resaltadores 30.00

11.2 Servicios (S/.)

Internet 25.00

Impresiones, empastado 150.00

Lectura de Espectros 200.00

11.3 Inversión

Total = S/. 4,250.00

12. Financiación

Modalidad: el proyecto será financiado por las autoras

PLAN DE INVESTIGACIÓN

1. Problema:

1.1 Enunciado del Problema

¿Poseerán actividad antioxidante los flavonoides presentes en las hojas de la especie de Polimnia lehmanii “LLARETA”?

1.2 Definición y Delimitación

En la actualidad existe evidencia contundente que indica que los radicales libres causan daño oxidativo a los lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Los radicales libres se encuentran naturalmente en el cuerpo humano como un subproducto del metabolismo y pueden ser generados por los macrófagos como parte del proceso de fagocitosis. También se pueden formar por exposición a radiación, humo del tabaco, ciertos contaminantes, disolventes orgánicos, pesticidas e inclusive durante el ejercicio intenso. Los radicales libres tienen mucho que ver con la etiología o historia natural de muchos padecimientos como el cáncer y enfermedades cardiacas, vasculares y neurodegenerativas. Por lo tanto, los antioxidantes, que pueden neutralizar a los radicales libres, pueden ser de vital importancia en la prevención de estas enfermedades.

Entre los más conocidos figuran los tocoferoles, el ácido ascórbico, los flavonoides, antocianinas, carotenoides, ácidos fenólicos1

Se han propuesto diversos métodos para determinar la actividad antioxidante de estos compuestos, los cuales se basan en su capacidad para captar radicales libres, tanto en fase orgánica como en fase acuosa2, 3.

Entre ellos se puede mencionar el uso del radical 2,2-difenil-1-picril hidracilo (test del DPPH•), del radical ABTS• (test del status antioxidante total), la reacción de peroxidación del linoleato, (test LH/LUV) y la reacción con el óxido nitroso (test NO) y otros.

La capacidad antioxidante de muchos compuestos fenólicos se ha estudiado recientemente con un gran interés. Muchos investigadores han estudiado la actividad antioxidante de los flavonoides y han tratado de relacionar esta actividad con su estructura

Los flavonoides son compuestos polifenólicos con un esqueleto de 15 átomos de carbono con un anillo bencénico fusionado a un anillo cromano (C) que está unido a su vez a un segundo anillo aromático (B) que puede estar en la posición 2, 3 o 4.

La presencia de grupos o-dihidroxi en el anillo B, de un doble enlace entre los carbonos 2 y 3 junto con un 4-oxo en el anillo C, y de grupos hidroxilo en los carbonos 3 y 5 junto con el 4-oxo en los anillos

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