Experiencia de Laboratorio.Tinción bacteriana
Enviado por lady_vellocet • 28 de Junio de 2017 • Informes • 769 Palabras (4 Páginas) • 159 Visitas
Experiencia Laboratorio N°3
Nombres: Florencia Arrau, Ignacio Durán.
Profesora: Liliana Godoy.
Objetivos:
- Conocer el procedimiento de distintas técnicas de tinción bacteriana.
- Conocer la función de los colorantes utilizados de cada técnica de tinción.
- Identificar las estructuras y clasificar según resultados de las tinciones.
Introducción:
El término morfología hace referencia a la forma de un organismo, en las células procariotas se presentan varias morfologías y existen distintos términos apropiados para describirlas. En la microbiología es necesario estudiar las estructuras de las células bacterianas para poder clasificarlas, pero a veces el microscopio no es suficiente para poder identificarlas. Por lo que existen distintas técnicas de tinción, las cuales consisten en que se fije el colorante en la bacteria, ayudando a hacer un contraste de colores haciendo más fácil la visibilidad de éstas. Los colorantes son compuestos orgánicos y cada tipo de colorante tiene una afinidad por determinados componentes celulares.
Para entender mejor como es el procedimiento de tinción se tomará una muestra de tres bacterias distintas para realizar un frotis, así posteriormente seguir con la fijación y finalmente la tinción.
En este laboratorio se realizará la técnica de tinción de esporas utilizando verde malaquita en el cual se deberá determinar si existe la presencia de endoesporas, también se utilizará la Tinción de Gram en el que se identificará si se trata de una bacteria Gram positiva o negativa, ésta a su vez determina la estructura y la pared celular externa de la bacteria.
Procedimiento experimental
- Preparación del frotis: en el caso de que el microorganismo este en estado sólido:
- Agregar 1 gota de agua destilada al portaobjetos
- Con un asa tomar un inoculo del microorganismo deseado (teniendo en cuenta trabajar al lado del mechero)
- Esparcirlo a lo largo del portaobjetos
- Evaporar el agua sobrante a través de movimientos a lo largo del mechero
- Preparación tinción Gram:
- Una vez preparado el frotis agregar colorante cristal violeta por 2 minutos y luego lavar con agua
- Agregar solución de yodo Lugol durante 1 minuto y lavar con agua
- Decolorar con alcohol cetona durante 30 segundos y lavar con agua
- Agregar safranina durante 15 segundos y lavar con agua
- Secar el portaobjeto y observar en microscopio
- Preparación tinción de esporas:
- Una vez preparado el frotis agregar una solución de verde malaquita previamente calentada durante 5 minutos
- Agregar safranina durante 2 minutos y lavar en agua
- Secar el portaobjetos y observar en microscopio
Resultados:
Tabla 1: resultados observados en cada tinción.
Muestra | OBSERVACIÓN |
Salmonella Enteritidis | Al realizarle la tinción de Gram se observó al microscopio que tenía un color rojo casi rosado, por lo que se determinó que esta bacteria es Gram negativa. |
Pseudomona Aeruginosa | Al observar en el microscopio no se pudo determinar si era Gram positiva o Gram negativa, ya que hubo problemas de tinción. Teóricamente se trata de una Gram Negativa. |
Bacillus Cereus | Se observaron endoesporas gracias al verde malaquita, teóricamente se sabe que es Gram positiva. |
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