Extracción De Encimas

INTRODUCCION.

El almidón es un polisacárido constituido principalmente por largas cadenas de glucosa, en su forma nativa está constituido por α-amilasa y amilopectina Es el principal polisacárido de reserva de origen vegetal, es más abundantemente en semillas de cereales y tubérculos.

En 1930 se conocía mucho acerca de las propiedades y acción de las enzimas cuando era muy poco lo que se sabía sobre las propias enzimas: la cuestión de si las enzimas eran o no proteínas fue motivo de muchas controversias. Los conocimientos eran tan unilaterales debido a que no existían medios para estudiar las enzimas directamente. Toda la información se había deducido indirectamente a partir de los efectos de las enzimas sobre sus sustratos.

El primer trabajo sobre extracción de enzimas se remonta al año 1897 donde Buchner preparo el primer extracto enzimático libre de células.

Para poder seguir con su estudio fue necesario aislar enzimas purificándolas en cantidades similares al sustrato y examinarlos directamente lo que fue posible en 1926.

Las enzimas son proteínas producidas por células vivas que se encargan de catalizar reacciones bioquímicas termodinámicamente espontáneas, esta función la llevan a cabo mediante su sitio activo el cual es la porción de aminoácidos que se une al sustrato para que se lleve a cabo la reacción, la función de las enzimas es dependiente de una temperatura y pH óptimos, mismos que son específicos para cada enzima, en algunas ocasiones las enzimas requieren de la ayuda un cofactor o coenzima para llevar a cabo su función.

Las amilasas son enzimas extracelulares, responsables de la hidrolisis del almidón, cortando cadenas de azucares en cadenas más cortas, catalizan la hidrólisis de los polisacáridos, tales como amilopectina, amilosa, glucógenos y sus productos parcialmente hidrolizados. Actúan sobre los enlaces α-(1-4) y/o α (1-6). Se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza, En el hombre la α-amilasa está presente en el páncreas (aproximadamente 200 mg/kg), glándulas salivales, hígado, músculo, tejido adiposo, saliva, sangre, orina, heces, leche, semen, riñón, cerebro, pulmón, trompas de falopio, intestino, bazo y riñón.

Los ensayos enzimáticos cuantitativos además de detectar solamente la actividad catalítica evidencian la cantidad de enzima activa presente en una muestra y puede ser expresada en moles o bien, en unidades enzimáticas o UI; definiendo esta ultima como la cantidad de enzima necesaria para degradar 1 mol de sustrato por minuto.

Hay diversidad de protocolos útiles para detectar la actividad enzimática y generalmente se basan en la medición del sustrato consumido o la liberación de elementos producidos durante la reacción en un tiempo determinado. Uno de los equipos más utilizados en este tipo de ensayos es el espectrofotómetro ya que muchas de las técnicas miden la variación en la absorbancia mientras se lleva a cabo la reacción, la absorbancia obtenida es transformada, con ayuda de ciertos cálculos a U/ml.

La detección enzimática de celulasas y amilasas se realiza de manera cualitativa por técnicas electroforéticas en geles de poliacrilamida copolimerizada con un sustrato

Especifico, correspondiente a la actividad enzimática que se busca; esta técnica es conocida como zimografia o zimograma.

Generalmente, una vez terminada la corrida de electroforesis, el gel se somete a incubación donde, la combinación de pH y temperatura brinda condiciones óptimas para que se lleve a cabo la actividad enzimática y pueda ser fácilmente detectada. Por el contrario si no se conoce las condiciones idóneas, se puede realizar la incubación a diversos pH y temperaturas, asumiendo que en aquella combinación donde la actividad enzimática sea más evidente corresponderá

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