Extracción RNA covid-19

Para la extracción y purificación de RNA , se ha de conseguir que los ácidos nucleicos tengan la mayor pureza posible pero previa a la extracción se ha de realizar el proceso de lisis celular.

LISIS CELULAR.

Durante este procedimiento se procede a la destrucción de las estructuras formadas por lípidos y proteínas permitiendo la liberación de los ácidos nucleicos. La lisis se lleva a cabo mediante una solución salina que suele contener detergentes que desnaturalizan las proteínas y/o proteasas. Existen tampones de lisis, como tiocianato de guanidina 4M y tritón X-100 al 3% que ayudan a desintegrar el virus.

Una vez realizado el paso anterior, pasamos a la extracción propiamente dicha. El proceso de extracción de los ácidos nucleicos es el paso previo y necesario para los ensayos que se van a realizar con posterioridad y se necesita que esta extracción sea con alta pureza. Si las muestras tienen niveles bajos de virus se deben aplicar técnicas como homogeneización o digestión enzimática de muestras sólidas o viscosas. También son necesarias endonucleasas que liberan genomas de las partículas virales. Así se aumentaría la concentración de ácidos nucleicos virales antes de la extracción.

MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE RNA PARA COVID-19

Actualmente se utilizan dos métodos principales de extracción:

a)Cromatografía de adsorción en columna de sílice

En presencia de ciertas sales los ácidos nucleicos quedan retenidos por adsorción en columnas de sílice. Posteriormente las columnas se lavan con soluciones salinas que eliminan las partículas que no se han unido y finalmente los ácidos nucleicos son eluidos con agua o una solución con una baja concentración de sales.

Este método está basado en la adsorción reversible del ARN a un soporte de sílice (membrana) que bajo condiciones determinadas de pH y fuerza iónica permite la limpieza del ácido nucleico y su posterior recuperación.

El elemento aglutinante en los sistemas de columna suele estar compuesto por partículas de vidrio o polvo, matrices de sílice, tierra de diatomeas e intercambiadores iónicos. En este método la unión de ácidos nucleicos se optimiza con buffers específicos y concentraciones de sales y pH extremadamente precisos.

Los lisados de muestras se pasan a través de la membrana de sílice usando fuerza centrífuga, lo cual da lugar a la unión del ARN al gel de sílice al pH apropiado. A continuación se lava la membrana que contiene proteínas residuales y sal para eliminar las impurezas. Posteriormente el ARN se eluye con agua libre de RNAsa.

b)Bolas magnéticas:

En este método las muestras lisadas se mezclan con esferas magnéticas con capacidad

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