INMUNODIFUSIÓN EN GEL AGAR

Fundamento: Empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión “doble”), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible.

Cuando un anticuerpo es puesto en contacto con el antígeno correspondiente, se forman complejos antígeno-anticuerpo que se insolubilizan en su mayor parte, dando lugar a una reacción de precipitación.

Empleando soportes adecuados es posible que los antígenos y anticuerpos migren con diferentes velocidades, de modo que al encontrarse interreaccionen y precipiten. Los geles utilizados como soporte tienen como base pectina, alginatos, poliacrilamida e incluso pueden utilizarse tiras de acetato de celulosa gelatinizado. Los precipitados que se originan se visualizan como bandas, que permanecerán estables mientras un mayor flujo de moléculas de alguno de los reactivos empleados no provoque su redisolución.

Se utiliza normalmente el método de Oucherlony o de doble difusión. Consiste en enfrentar en pequeñas perforaciones efectuadas en el agar, las soluciones de antígeno y anticuerpo. Al difundir y ponerse en contacto, producirán una banda de precipitación sólo si se encuentran en concentraciones óptimas. Si ésta concentración es la que corresponde a la zona de equivalencia de la banda de precipitación estará situada aproximadamente en la distancia media que separa los reservorios. Cuando hay exceso de antígeno o anticuerpo, la banda estará más próxima al pocillo del anticuerpo o del antígeno, respectivamente.

Este sistema permite identificar las bandas de precipitación mediante el empleo simultáneo de antígenos y anticuerpos conocidos.

Se pueden observar tres tipos de reacciones

a. Reacción de identidad: los dos sistemas difunden en una única banda de precipitación.

b. Reacción de no identidad: cada sistema reacciona independientemente, originando bandas de precipitación que se cruzan.

c. Reacción de identidad parcial: Se produce cuando uno de los antígenos tiene menos de un componente y es capaz de dar una reacción cruzada con un anticuerpo elaborado contra un antígeno más simple. En este caso las bandas de ambos sistemas se unen y funden parcialmente en una banda, apareciendo una prolongación o espolón. Esto indica que en este antígeno hay componentes antigénicos no compartidos.

Este método, que debido a su sencillez, se puede realizar en cualquier laboratorio, ha sido utilizado prácticamente en todas las virosis,. como método de diagnóstico serológico. Debido a su limitante, la baja sensibilidad, ha sido desplazado por otras técnicas.

Aplicaciones en Veterinaria

En la actualidad esta prueba se utiliza para identificar reactores para las siguientes infecciones: Fiebre aftosa, Leucosis Bovina Enzoótica, Lengua Azul, Anemia Infecciosa Equina, Enfermedad de Gumboro, Bronquitis Infecciosa.

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