Introduccion Electroforesisi

INTRODUCCION:

Electroforesis es la migración de las moléculas cargadas presentes en una solución acuosa como respuesta a la presencia de un campo eléctrico, dichas moléculas son atraídas hacia el polo opuesto a su carga neta. Dos fuerzas de acción opuesta determinan la velocidad de la partícula en cuestión. Por un lado, la fuerza eléctrica, que la atrae al electrodo, cuya intensidad es directamente proporcional a la carga, y, de acuerdo a la segunda ley de Newton (F=m x a, entonces a=F/m), le impone una aceleración directamente proporcional al cociente carga/masa (q/m). Por otro lado, la fuerza de rozamiento, que se opone a la migración con una intensidad que depende del tamaño y la forma de la partícula y de las características del medio (viscosidad y estructura, por ejemplo).

La electroforesis se utiliza en el laboratorio para separar macromoléculas en solución, en forma analítica (es decir, sólo para verlas) o preparativa (para purificarlas). Los ácidos nucleicos tienen un fosfato cargado negativamente por nucleótido. Como el peso molecular de los cuatro nucleótidos es similar, la relación q/m es independiente de la secuencia y el tamaño de la molécula. Por lo tanto la aceleración impuesta por la fuerza eléctrica es igual para cualquier molécula de ácido nucleico. La única diferencia en velocidad de migración estará dada por diferencias en la fuerza de rozamiento, o sea de su forma y de su tamaño.

En el caso del DNA doble cadena, la forma es la misma para cualquier molécula, entonces las distintas moléculas tendrán una velocidad que sólo dependerá de su tamaño, es decir, de su longitud en pares de bases. Sin embargo, si tratáramos de separar moléculas de DNA doble cadena en una electroforesis en una solución acuosa, nos encontraríamos con que el rozamiento impuesto por ésta es tan pequeño que todas las moléculas migrarían juntas. Además, durante la electroforesis, las moléculas se separarían unas de otras por difusión, impidiendo el análisis. Para lograr una separación eficiente, se utiliza un medio soporte que aumente considerablemente la fricción recibida por las macromoléculas y reduzca la difusión a un mínimo.

Este medio suele ser una red molecular de algún polímero orgánico, conocida como gel, por su consistencia gelatinosa. Los más utilizados en laboratorios de biología molecular son de poliacrilamida, una red molecular estabilizada por uniones covalentes, y agarosa (un derivado del agar-agar), un polisacárido extraído de un alga que forma, al disolverlo, una red estabilizada por interacciones no covalentes. Las mezclas de DNAs de distinto tamaño se hacen migrar (desplazarse) a través del gel durante un cierto tiempo y se obtiene una separación en la que la distancia migrada por una molécula dada es inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular (o de su longitud en pares de

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