LABORATORIO #1 OBSERVACIONAL PCR Y ELECTROFORESIS

MARIA YULIANA JARAMILLO RIOS

YULIANA MARCELA GÓMEZ

VALENTINA FRANCO

LABORATORIO #1 OBSERVACIONAL

PCR Y ELECTROFORESIS 

RESUMEN: 

En este informe se obtuvo resultados por la experimentación realizada en el laboratorio observacional en el cual el docente implemento la tecnología PCR con un ADN de un hongo donde se obtiene una clonación del ADN(Universidad, n.d.). Y por medio de la electroforesis se realiza una separación de ácidos nucleicos por medio de una corriente eléctrica y realizan la migración de un polo negativo a un polo positivo y el marcaje de genes.

PALABRAS CLAVE: ADN, PCR, Electroforesis, Ácidos Nucleótidos,

ABSTRACT:

In this report results were obtained by the experimentation carried out in the observational laboratory in which the teacher implemented PCR technology with DNA from a fungus where DNA cloning is obtained. And by means of electrophoresis a separation of nucleic acids is performed by means of an electric current and migration from a negative pole to a positive pole and gene labeling.

KEY WORDS: DNA, PCR, Electrophoresis, Nucleotides Acids

INTRODUCCIÓN

PCR es la amplificación y multiplicación del ADN en este caso de una colonia de hongos identificando así el mecanismo de amplificación que luego (Universidad, n.d.)se lleva a la electroforesis que realiza la separación de proteínas o ácidos nucleicos que se lleva a cabo por el gel de agarosa y con la fuente de poder para realizar la migración de los ácidos nucleicos los cuales poseen grupos ionizables (cationes o aniones)(Antioquia, n.d.). la electroforesis es uno de los métodos mas sencillos para la separación de moléculas de ADN por medio de electrodos como se decía anteriormente estos poseen grupos ionizable ya sean cationes o aniones el cual permite una migración de un polo negativo al polo positivo, entre mas grande sea DNA menos posibilidad tiene de migrar ya que el gel de agarosa genera resistencia y no permite el cambio del polo negativo al polo positivo(Alicia et al., n.d.). por medio de la electroforesis se obtiene los productos de la PCR es decir primero se realiza la multiplicación del ADN luego se vierten en unos posos para hacer el proceso los electrodos realizar la migración del DNA y por ultimo pasan a una cámara de luz ultra violeta.

El gel de agarosa el cual es utilizado para realizar la electroforesis se comporta como un tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma el cual es el que permite la migración y separación del ADN(Alicia et al., n.d.). La distancia que recorre el DNA o RNA es proporcional al logaritmo del peso molecular y para determinar este peso es importante implementar los marcadores de tamaño para calcular dicho peso.

Los ácidos nucleicos son moléculas que contienen información genética que tienen una estructura de polímeros lineales de nucleótidos y los enlaces que los une son el enlace fosfato sin tener una periodicidad aparente. Estos se pueden clasificar en el ADN y ARN esto varia por su composición química ya que uno es ácido desoxirribonucleico (ADN) que se encuentra en el núcleo y el otro seria ácidos ribonucleicos (ARN) que actúan en el citoplasma lo que varía en estos dos ácidos nucleicos son los azucares y en donde actúan.  

METODOLOGÍA

en este estudio el docente aísla los ácidos nucleicos o se extraen de los demás componentes como las proteínas y lípidos, este laboratorio el docente implementa una muestra de ADN de una colonia de hongos. de donde se extrae el ADN luego de obtener la molécula se realiza un respaldo en la cámara de flujo laminar donde empieza de por si el proceso de PCR donde se multiplica la muestra para la obtención de este se implementa una enzima, TAQ polimerasa, cebadores de secuencia, un fragmento corto de ADN o la primera molécula antes de ser multiplicada.

Los reactivos a implementar serian un buffer tbe 10x cargado de sales el cual ayudara a que no se genere un corto circuito y regule el pH, H2O (agua) y MgCl2 (cloruro de magnesio)

                                            Tabla1: PCR aplicación gen 5,85 Muestras 542

Todo este proceso tiene una durabilidad de 4 a 5 horas sin embargo fue un laboratorio observacional donde el docente ya tenía el laboratorio mayormente preparado y solo se implementa el montaje del estudio.

Para este estudio hay que tener presente que la PCR se divide en 3 fases las cuales son  desnaturalización que se da por una temperatura de 94°C la cual consiste en romper los puentes de hidrogeno del ADN(Díaz & Rentería, n.d.) para generar cadenas dobles de DNA las cuales se desnaturalizan quedando en forma de cadenas sencillas, por medio del termociclador ajusta la temperatura a 60°C luego de que el termociclador lo ajusta pasa a la segunda fase que es la de alineamiento la cual se forman y rompe constantemente los puentes de hidrogeno entre los oligonucleótidos (son secuencias cortas de DN o ARN con más pares de bases o menos), y el ADN(Díaz & Rentería, n.d.), en esta los primeros se pegan en una fase especifica la cual es el genoma por acción de la polimerasa. Después la temperatura empieza a subir a los 72°C y cuando esto ocurre pasa la ultima fase la cual se llama extensión; esto se da ya que a los 72°C la enzima polimerasa alcanza su máxima actividad, lo cual implica que los oligonucleótidos que son artificiales generen las nuevas cadenas de ADN. (Díaz & Rentería, n.d.)

RESULTADOS

El resultado obtenido de la PCR y la electroforesis en conjunto tuvimos un segmento de 600 Pb (pares de bases) ya que en la electroforesis se mide desde 1000 a 100 pares de bases y con el marcador de peso molecular nos permitió determinar que fueron los 600 Pb (pares de bases) aproximadamente.

ANÁLISIS DE RESULTADOS

• Después de realizada la primera parte de la PCR que es la amplificación o multiplicación de los genes que se da por medio del flujo laminar y luego pasa a la cámara de electroforesis conectada a una fuente de poder durante 40 minutos donde se visualiza una migración de los electrodos de un polo negativo a un polo positivo (esto se visualiza como un burbujeo). tener presente que esta cámara contiene un porcentaje alto de sales para que así no se genere un corto circuito y se regule el pH
• Por medio del gel de agarosa es posible realizar este tipo de procedimientos ya que permite la separación de las moléculas del ADN.
• El colorante que contiene el tapón de carga es  el que permite un marcaje de las bandas que contienen las muestras de ADN de la colonia de los hongos

CONCLUSIONES

• Cuando se realiza una practica de laboratorio en la biología molecualr y se presenta un error en el montaje del estudio se perderá tiempo y a la vez dinero y no habrá resultado alguno.
• La técnica de PCR y electroforesis deben ir de la mano ya que tu no se sabrá si la práctica de la PCR no se observaran los resultados ya que por medio de la electroforesis se obtendrán y observaran los resultados
• La electroforesis y PCR son estudios que facilitan diversos estudios para identificar y amplificar las diversas moléculas de ADN que sean beneficiosas o no en los diferentes organismos vivos

ANÁLISIS DE RESULTADOS (PREGUNTAS)

1. ¿Cuáles son las aplicaciones de PCR?

• R/ identificar enfermedades infecciosas tales como SRAS-CoV-2(Felipe et al., n.d.)
• Pruebas de paternidad (Felipe et al., n.d.)
• Diagnósticos de patógenos por PCR(Felipe et al., n.d.)

1. ¿Por qué el paso de desnaturalización se realiza en el primer ciclo de PCR más largo que dichos pasos en el resto de los ciclos?

R/esto da ya que se debe calentar la mezcla a una temperatura de 94°C para así obtener el rompimiento de los puentes de hidrogeno el cual une la doble cadena, y así formar cada una de las cadenas que fueron separadas como en un molde y así obtener la síntesis de una nueva cadena  (Cohmol, 2001)

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