La técnica de la fotocolorimetría

Introducción

La técnica de la fotocolorimetría, no sería posible sin la base de la fotometría, la cual es la ciencia que se encarga de la medición de la luz, como por ejemplo el brillo percibido por el ojo humano, esta proporciona una medida directa del flujo de energía recibido de los objetos celestes en un intervalo de longitud de onda. Es decir, esta ciencia tiene la capacidad que tiene la radiación electromagnética de estimular el sistema visual; en relación a lo mismo y a lo que va centrado nuestro laboratorio práctico, está el término de absorbancia que ocurre al momento que un haz de luz incide sobre un cuerpo traslúcido, y una parte de esta luz es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo.

El trabajo consiste en explicar el experimento que se llevó a cabo, utilizando el reactivo de Biuret, el cual es un producto que detecta la presencia de sustancias orgánicas, también trabajamos con la albúmina, una muestra problema que también fue albumina, y ocupamos el espectrofotómetro

Objetivos

- Llevar a cabo el experimento de forma correcta, llegando a los datos esperados.

- Lograr medir la absorbancia de las soluciones que se nos piden a lo largo del laboratorio.

- Entender mediante el experimento las técnicas de la fotocolorimetría por las leyes de Lambert- Beer.

- Aprender a usar los instrumentos de laboratorio de manera correcta, como por ejemplo el espectrofotómetro y la micro pipeta.

- Seguir las instrucciones del manual de seguridad y las normas del laboratorio.

Materiales

Primer Paso:

Tomamos 7 tubos de ensayo y una gradilla, enumeramos 6 tubos de ensayo (de 1 a 6). Según el experimento el tubo marcado con el numero 1 debía tener 2 mg de albumina, el tubo marcado con el numero 2 debía tener 4 mg, el marcado con el numero 3 debía tener 6mg de albumina, el marcado con el cuatro 8 mg, el quinto tubo debía tener 10 mg de albumina y el sexto en vez de albumina debía tener 1 ml de agua destilada.

Para vaciar el sustrato a cada tubo utilizamos una micro pipeta, la cual mide en microlitro (μl) por lo cual previamente hicimos los cálculos para pasar de mg a μl. Luego enrasamos cada tubo con agua destilada hasta llegar a un volumen final de 1 ml, para esto igual que con la albumina usamos una micro pipeta. Hubo que hacer los cálculos necesarios para saber la cantidad exacta de agua destilada que había que echarle a cada tubo ya que cada tubo tenía una cantidad distinta de albumina, por lo tanto al tubo uno le agregamos 800 μl, al tubo dos 600 μl, al tubo tres 400 μl, al tubo cuatro 200 μl y el tubo cinco ya contenía 1 ml de albumina por lo tanto no hubo que enrasar con agua destilada.

Segundo Paso:

El séptimo tubo debía contener una muestra problema, se nos indico que sacáramos 300 μl de ella y al igual que con los seis primeros tubos tuvimos que enrasar hasta 1 ml, por lo tanto agregamos 700 μl de agua destilada.

Tercer Paso:

En un vaso precipitado sacamos 1ml de reactivo de Biuret por cada tubo, por ende el volumen final de reactivo era de 7 ml. Luego con una pipeta normal sacamos 5 ml y vaciamos 1ml en cada tubo, a continuación sacamos los 2 ml restantes y los vaciamos en los tubos que faltaban, quedando cada tubo con un volumen final de 2 ml.

Dejamos reposar las muestras por 10 minutos.

Cuarto Paso:

Debido a que la solución en los tubos se encontraban muy concentradas, el profesor encargado solicito que agregáramos 1ml más de agua destilada a cada tubo, luego de esto esperamos 10 minutos.

Quinto paso:

Vaciamos el contenido de cada tubo en un compartimiento de muestra de espectrofotómetro para comenzar la medición. Ordenamos cada uno desde el con menor concentración de albumina (tubo seis que solo contenía agua destilada) al más concentrado (tubo cinco con 10 mg de albumina) dejando al final el portador de muestra con la solución preparada de la muestra problema.

El profesor coloco las 4 primeras

...