Laboratorio De Microbiologia

U.N.Sa – Facultad De Ingeniería Pedraza, Fernando Alejandro

Ingeniería Química Spezzi, Daniel A

Cátedra: Fundamento De Biotecnología – Comisión A Navarrete, Esteban

Soriano, Américo

INFORME DE LABORATORIO Nº 2.

OBSERVACIÓN MACRO Y MICROSCÓPICO DE CULTIVOS MICROBIANOS

Objetivos:

• Conocimientos de técnicas generales de cultivos y de coloración, que facilitan la caracterización de microorganismos.

Introducción Teórica:

Microscopia Óptica.

El Microscopio de campo claro es utilizado para observar células intactas, está compuesto por dos series de lentes:

la lente de objetivo y la lente del ocular, que funcionan conjuntamente para producir la imagen; en este tipo de microscopio las muestras se visualizan gracias a las diferencias de contraste entre ellas y el medio que las rodea, esta se produce porque las células absorben o dispersan la luz en diferentes grados. El aumento total de un microscopio es el producto del aumento debido a la lente del objetivo por el Aumento de la lente del ocular, el límite de este viene dado por la propiedad de la resolución de las lentes, el cuál depende de dos factores: uno, es la longitud de onda electromagnética utilizado por la iluminación, la resolución es inversamente proporcional a la longitud de onda. El segundo factor es el poder máximo de admisión de luz de las lentes del objetivo, que está determinado por su abertura numérica (una medida de la capacidad de captación de la luz por la lente) Cuando los objetivos son de poco aumento se denominan objetivos secos y para grandes aumentos (100x) se utiliza aceite de inmersión llamándolos objetivos de inmersión. El aceite es utilizado porque al aumentar la capacidad de captación de la luz por la lente, lo que facilita que los rayos que emergen de la muestra con gran ángulo (y que se perdería por no llegar a la lente objetivo de otro modo) sean captados y percibidos.

Tinciones:

Una de las limitaciones de la microscopia de campo claro es el escaso contaste. Se puede utilizar colorante para teñir las células y aumentar su contraste facilitando su observación. Los colorantes son compuestos orgánicos y cada tipo de colorante tiene afinidad por determinados componentes celulares.

Diferentes tinciones:

Simples: Se realizan sobre preparaciones previamente secadas en portaobjetos fijados, se derrama una pequeña cantidad de una disolución diluida de colorante, lo que provoca la tinción de las células lo que aumenta un contraste facilitando su observación en el microscopio.

Diferenciales:

a) Tinción de Gram: a partir del resultado de esta tinción, las bacterias pueden dividirse en dos grandes grupos: Gram positivos y Gram Negativos.

b) Tinción de Ziehl-Neelsen: es un método diferencial porque mediante su uso distinguimos los microorganismos ascidoresidentes de los que no los son.

Tinción Negativa: No es de coloración de las bacterias, sino del fondo con un negro denso, lo que provoca que los microorganismos incoloros ofrezcan como zonas brillantes en el campo oscuro. Utilizando para el examen de gérmenes que no puedan teñirse por los métodos ordinarios.

Materiales:

• Microscopio de campo claro.

• Materiales de vidrio.

• Cultivos proporcionados por la cátedra.

1) Observación microscópica de colonias.

a) Características de los cultivos de Agar inclinado.

Tubo 1: Filiforme.

Tubo 2: Esparcido.

b) Características de las colonias en la placa Petri.

Colonia Pigmentación Forma de la colonia Característica del borde Característica de elevación

A Blanca Circular Entera Plana

B Crema Circular Entera Convexa

C Amarillentas Circulares Enteras Hamelonada

D Beig Puntiforme Entera Convexa

E Verde Filamentosa Copulada

2) Observación microscópica de preparación húmeda.

Colonia Tamaño Movimiento Forma Ocular Objeto

A Pequeños Si Cocos 10x 40x

D Grandes No Bacilos 10x 40x

Tubo 1 Pequeños Si Cocos 10x 40x

3) Observación microscópica de preparaciones secas.

3.2) coloración de Gram.

Colonia Tamaño Movimiento Forma Ocular Objeto Gram

Tubo 2 Pequeños Si Bacilos 10x 40x Negativo

B Pequeños No Cocos 10x 40x Positivo

E Grande No Hongo 10x 40x -----------

3.3) Coloración de Espora.

De La Muestra Color Forma Cantidad Objeto Ocular

Tubo 2 Rosa Cocos Muchas 10x 40x

C Rosa Cocos Pocos 10x 40x

E Rosa Bacilos Muchos 10x 40x

4) Observación microscópica de:

De La Muestra Color Forma Cantidad Objeto Ocular

Levadura Cocos Muchas 10x 40x

Hongo Verde Hongo Muchos 10x 40x

Indice de viabilidad (IV): (Nº de células incoloras) * 100

(Nº de células incoloras + Nº de células coloreadas)

IV = 120 *100 =

40 + 120

Conclusión:

Se aprendió el manejo del microscopio y algunas de las técnicas de tinción de microorganismos.

Biografía:

• Brock – Biologia de los Microorganismos.

• Schelegel H. G. – Microbiología General.

• Crueger W. – Crueger A. Biotecnología: Manual de Microbiología Industrial.

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