LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA,

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA[pic 2]

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE ACAPULCO

PRÁCTICA 7:  

GRAM NEGATIVOS

MICROBIOLOGÍA GENERAL “B”

PROFESOR: M.C. MIGUEL ANGEL DÍAZ ALDAY

INTEGRANTES DEL EQUIPO

• ARIAS MARTINEZ JONATHAN
• ESTRADA MARRUFO BEATRIZ VALERIA
• ESCALANTE ESPARZA OTEO MANUEL

• ESPINOZA GALENA STEPHANY JAQUELINE
• GATICA REYES NAYELY
• VILLAVICENCIO DIAZ OMAR

  DE 9 DE NOVIEMBRE DEL 2015

Contenido

Introducción……………………………………………………………………pag.3-4

Teoría……..……………………………………………………………………pag.4-7

Material y Equipo……………………………………………………………..pag.7-8

Procedimiento…………………………………………………………………pag.8-12

Tratamiento de datos……….…………………………………………………pag.13

Resultados……………………………………………………………………pag.14-16

Conclusión….……………………………………………………………………pag.16

Apéndice………………………………………………………………………….pag.18

Bibliografías……………………………………………………………………pag.19

INTRODUCCIÓN

1. RESUMEN: Entendemos como bacterias Gram Positivas a los grupos de bacterias que no poseen una membrana externa que sea capaz de proteger al citoplasma bacteriano, es por esta característica que podemos distinguirlas gracias a que son capaces de teñirse de azul oscuro o violeta durante la tinción de Gram. Las bacterias Gram Positivas conforman uno de los principales grupos de bacterias y a todas las bacterias restantes podemos considerarlas Gram Negativas. Dentro de esta categoría encontramos especies que pueden ser móviles, inmóviles, con formas de bacilo o coco, con paredes celulares gruesas o carentes de esta.

De igual manera se clasifican por el requerimiento de oxígeno que presenta, lo que refleja tres grupos de bacterias, que son las anaerobias estrictas, anaerobias facultativas y aerobias.

B) OBJETIVOS

Objetivo General:

Determinar mediante pruebas bioquímicas  GRAM POSITIVA.

Objetivos Específicos:

1. Realizar siembras en los medios Agar Sangre, Agar Chocolate y Agar 110 para el aislamiento de gram negativos.
2. Realizar las pruebas bioquímicas: Catalasa y Oxidasa, DNAsa, Novobiocina, CAM para la identificación de enterobacterias aisladas Positivas.
3. Interpretar los resultados de las pruebas bioquímicas realizadas.

C) CONCEPTOS NUEVOS         

Pruebas Bioquímicas: Las pruebas bioquímicas son una serie de pruebas las cuales dependiendo su reacción nos permiten identificar los diferentes tipos de microorganismos que se encuentran presentes en el medio. 

 D) NOMENCLATURA

1. Milímetros (mm)

2. Litro (L)        

3. Gramos (g)

4. Kilogramos (kg)

TEORÍA

MATERIAL Y EQUIPO

Material:

• 10 ml de Sangre
• Cajas de Petri
• Porta Objetos esteriles
• Asa
• Hisopos
• Matraces de 250ml
• Mechero
• Palillos de madera        
• Pipetas de 2ml
• Probeta de 100ml
• Tubos de ensaye 13x100

Reactivos:

• Agar Chocolate
• Agar base Sangre
• Agar 110
• Caldo verde Bilis Brillante
• Agar Base Antibiotico
• Agar DNasa con verde metileno

Muestra:

• Esputo

PROCEDIMIENTO

PARTE 1 (PREPARACIÓN DE LOS AGARES, SIEMBRA)

Agar sangre        

1.- Se depositaron 1.44g de agar sangre en 36ml de agua destilada, posteriormente se dejó hidratar durante 15 min y posteriormente con ayuda del mechero se hirvió durante 1 min. Para después ser llevados a la autoclave y así esterilizarse por 30 min.

2.- Transcurrido los 30min de que estuvo en la autoclave, se depositaron 10ml de sangre en dicho matraz con el agar sangre se dejó reposar unos minutos y después se hizo el vaciado en placa en cada una de las cajas Petri previamente estériles.

3.- Se dejó solidificar, y continuamos a sembrar con la ayuda de un hisopo estéril, se tomó muestra de esputo.

4.- Por último se sellaron cada una de las cajas Petri y se metieron a la incubadora en un periodo de 24 a 48 horas, en aerobiosis con atmosfera de CO2.

Agar chocolate

1.- Se depositaron 1.44g de agar sangre en 36ml de agua destilada, posteriormente se dejó hidratar durante 15 min y posteriormente con ayuda del mechero se hirvió durante 1 min. Para después ser llevados a la autoclave y así esterilizarse por 30 min.

2.- Transcurrido los 30min de que estuvo en la autoclave, se depositaron 10ml de sangre en dicho matraz con el agar sangre y se volvió a calentar hasta que el agar tomara un color café chocolate y después se hizo el vaciado en placa en cada una de las cajas Petri previamente estériles.

3.- Se dejó solidificar, y continuamos a sembrar con la ayuda de un hisopo estéril, se tomó muestra de esputo.

4.- Por último se sellaron cada una de las cajas Petri y se metieron a la incubadora en un periodo de 24 a 48 horas, en aerobiosis con atmosfera de CO2.

PARTE 2 (PRUEBAS BIOQUÍMICAS)

• CATALASA

1.- Con la ayuda de un palillo, se transfirió parte del centro de una colonia a la superficie de un porta objeto esteril.

2.-Se agregó una gota de peróxido de hidrogeno al 3% y se observó la formación de efervescencia o burbujas.

• COAGULASA

1.-Se agregaron 1ml de plasma en un tubo de 13x100

2.- Posteriormente se agregó la colonia en estudio.

3.- y por último se mezcló para ver si había la presencia de coagulo.

• DNAsa

1.- Se sembró por estría gruesa la colonia en estudio, en el agar DNAsa

2.- Se sometió a la incubadora a 36°C por un lapso de 24horas.

• BACITRACINA

1.- Se prepararon 1.098g de agar base antibiótico en 36ml de agua destilada, se dejó hidratar por un lapso no mayor a 15min.

2.- posteriormente fue sometido a la autoclave durante un periodo de 30min. Una vez que transcurrió ese tiempo, se dejó que se enfriara un poco para que así se hiciera el vaciado en placa, en una caja de Petri estéril.

3.- Se dejó solidificar, y posteriormente con ayuda del mechero y un asa esterilizada se hizo la siembra y se colocó un disco de papel filtro previamente esterilizado y con la Bacitraciona y se presionó suavemente.

4.- Se incubó a 36°C por  24 horas.

• PRUEBA DE CAMP

1.- 1.- Se depositaron 0.72g de agar sangre en 18ml de agua destilada, posteriormente se dejó hidratar durante 15 min y posteriormente con ayuda del mechero se hirvió durante 1 min. Para después ser llevados a la autoclave y así esterilizarse por 30 min.

2.- Transcurrido los 30min de que estuvo en la autoclave, se depositaron 10ml de sangre en dicho matraz con el agar sangre se dejó reposar unos minutos y después se hizo el vaciado en placa en cada una de las cajas Petri previamente estériles.

3.- Se dejó solidificar, y posteriormente se hizo una estría de estafilococo y perpendicularmente se hizo una estría con la colonia en estudio.

4.- Incubar a 36°C por 24 horas.

• SAL Y MANITOL

1.- Se preparó  el agar sal y manitol, y se depositaron 5ml en cada tubo, fueron sometidos a la autoclave durante 30min.

2.- Posteriormente se colocaron los tubos en forma de pico de flauta.

3.- Una vez que solidificó, se hizo la siembra de la colonia en el tubo.

4.- Se metió a la incubar a una temperatura de 36°C durante 24 horas.

• TINCIÓN DE GRAM

FROTIS

1.- Con la ayuda de un mechero, se flameó un asa bacteriológica hasta el rojo vivo y se esperó  a que enfriara un poco.

2.-Se tomó  con la ayuda de una jeringa esteril unas gota de agua salina y se agregó  en un portaobjetos.

3-.Se flameó nuevamente el asa  y se esperó  a que enfriara.

4.-Con el asa se tomó un poco de muestra bacteriana a partir de una colonia aislada.

5.-Después se agregó la muestra en la gota de agua que estaba en el portaobjetos y se  homogeneizó suavemente con movimientos circulares.

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