Laboratorio Microorganismos

Objetivos

a) En relación a los diferentes medios de cultivo

- Comprender qué es y para qué sirve un medio de cultivo.

- Aprender cuales son los diferentes medios de cultivo existentes y saber para qué tipo de bacteria son utilizados.

- Informarse acerca de los distintos componentes que poseen los medios de cultivo para producir el crecimiento y desarrollo bacteriano.

b) tinción Gram

General:

Comprender la importancia de una tinción para la diferenciación de bacterias basándose en las propiedades estructurales de la pared celular, aplicando el mecanismo de la coloración de Gram, con microorganismos conocidos y desconocidos.

Aplicar los conocimientos adquiridos en las secciones

teóricas.

Específico:

Utilizar colorantes y comprender su utilización.

Realizar cultivos y aislamientos de microorganismos.

Manejar adecuadamente el microscopio óptico, conocer sus partes y funcionamiento.

Realizar una adecuada tinción de Gram.

Reconocer que la tinción Gram es una prueba útil y de fácil realización para el estudiante que le permite diferenciar las dos principales clases de bacterias.

Diferenciar los microorganismos Gram positivos y Gram negativos, analizar su morfología.

Aprender las técnicas de preparación y de coloración más empleadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianos.

Comprender que en el estudio de la microbiología, es fundamental la observación de los microorganismos. Esta observación se hace necesaria para su clasificación e identificación.

Introducción

En la naturaleza, existen una diversidad de especies, algunas tan pequeñas que son imperceptibles a nuestros ojos, dentro de esos microorganismos existen algunas bacterias que son microorganismos unicelulares con gran capacidad de multiplicación, de transferencia de material genético y de adaptación a cambios ambientales características que tienen en salud y biotecnologías.

Los microorganismos los podemos encontrar en cualquier parte del medio ambiente podemos observarlos realizando diferentes clases de cultivos y aislaciones como lo realizamos a lo largo de esta práctica.

La observación microscópica se constituye en una técnica de gran importancia para el estudio de los microorganismos, ya que permite conocer algunas de sus características, como son: forma, disposición o agrupación, presencia o ausencia de estructuras (cápsulas, esporas, flagelos), movilidad, entre otras. La tinción es una técnica que utiliza colorantes para aumentar el contraste entre los microorganismos y el medio que los rodea. Se utiliza para diferenciar los tipos de células, los constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, núcleo, mitocondria, etc. La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado.

Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas. A continuación se describirán los pasos realizados en ambos laboratorios para poder comprender todos los conceptos vistos en clases sobre medios de cultivo, tinción, microscopio y clasificación

Laboratorio Número uno.

1) Cada alumno debió presentar y usar vestimenta

Adecuada para comenzar con el procedimiento,

como delantal, guantes y mascarilla. El primero

de estos fue de carácter obligatorio.

2) Se le entregó a cada grupo de trabajó un medio de cultivo

ya preparado, para su elaboración se mezcló un sobre

de caldo maggy con gelatina sin sabor en frascos.

3) Se escogió lugares del cuerpo donde existiera una gran

cantidad de flora bacteriana, estos fueron mucosidad nasal,

cuerpo ungueal (uñas), ombligo y cabello.

4)Con hisopos de algodón se procedió a frotarlos

por lo lugares señalados en el paso anterior,

para la extracción de bacterias.

5) Se abrieron con sumo cuidado los frascos con e

l medio de cultivo y se añadieron las bacterias

a éste deslizando el hisopo suavemente y en

forma de zig-zag procurando no romper el medio

para la correcta realización del procedimiento.

6) Luego de la incorporación de las bacterias, se

realizó el cerrado de los frascos, dejando sellados

los cultivos para conservar su pureza y no ser

dañados al mezaclarse con bacterias del medio

exterior. Además se les identifcó marcando su

contenido y a quien pertenecía con un plumón.

7)Al día siguiente del cultivo, se hizo una revisión

para asegurarse de que la siembra se habíarealizado

de forma correcta y por ende que existieran colonias

de bacterias dentro de los frascos.

Laboratorio número dos

1) Con la ayuda de un mechero, se flameó un asa

hasta el rojo vivo y se esperó a que se enfriara un poco.

2) Se tomó con el asa una gota de agua estéril y esta

fue agregada en un portaobjetos.

3) Se flameó nuevamente el asa y se esperó a que

se enfriara.

4) Se tomó con el asa un poco de muestra bacteriana

a partir de una colonia aislada.

5) Después se agregó la muestra en la gota de agua

que está en el portaobjetos y fue homogenizado

suavemente con movimientos circulares

6) Se puso la muestra durante uno o dos seg. con la

llama de un mechero para fijarla, teniendo en cuenta

que el calor no debe ser directo.

7) Luego en las muestras se colocó una gota de violeta cristal

y se dejó ahí por 1 minuto.

8) Pasado el minuto se echó agua con la piseta y luego se

vertió el Lugol (yodo) por 1 minuto9)

Pasado el minuto se volvió a echar agua con la piseta,

de la misma manera que anteriormente. Después se

colocó un poco de acetona a la muestra.

10) Se volvió a echar agua y finalmente se agregaron

gotas de safranina. Se dejó reposar por 1 minuto y

pasado eso se vertió agua de la misma manera.

11) Finalmente, con toalla nova se secó un poco la muestra

y se colocó bajo el microscopio para observar los resultados.

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