CUltivo Para estudiar los microorganismos y determinar su relación con enfermedades infecciosas es necesario conocerlos por técnicas específicas de Laboratorio.

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO[pic 1][pic 2]

         FES ZARAGOZA

                      CARRERA: MÉDICO CIRUJANO      

MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA No. 4

TÉCNICAS Y TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Titular:

Dr Fernando Arellano Cobian

INTEGRANTES:

Cabrera Mora Fernando

Cadena González María Guadalupe

Mendoza Garcia Sandra Isabel

Melendez Vázquez Karla Aurora

Montiel de la Rosa Paola

Olvera Barrón Rosa María

Grupo:

 1107

Fecha de entrega:

09/02/17

Para estudiar los microorganismos y determinar su relación con enfermedades infecciosas es necesario conocerlos por técnicas específicas de Laboratorio.

Para Iograr esto es preciso conocer cuáles son los nutrientes y Ias condiciones físicas que requieren, ya que muchos de los microorganismos pueden sintetizar sus componentes orgánicos a partir de fuentes de carbono simple mientras que otros requieren de fuentes más complejas para crecer.

Existen nutrientes esenciales para los organismos que son metabolitos que no pueden sintetizar por ellos mismos, por lo tanto tienen que provenir de fuentes externas proporcionados con los medios de cultivo.

Solo las baterías, micoplasmas, hongos, levaduras y protozoarios pueden crecer por medios de cultivo artificiales in vitro, mientras los virus rickettsias, y clamidias requieren de cultivos de células vivas( in vivo) como embrión de pollo
o animales para su crecimiento y reproducción.

Cada organismo para su crecimiento o reproducción, requiere, dependiendo de sus sistemas enzimáticos, de diferentes nutrientes.

Podemos clasificar los medios de cultivo según su consistencia y serán

1. Medios líquidos
2. Medios sólidos
3. Medios semisólidos

1)  Los medios líquidos permiten el estudio del crecimiento bacteriano en términos de masa celular, con cambios que sufren estos medios en su color, turbidez, a simple vista, la forma de efectuar la siembra en el caldo es mediante “agitación” del asa dentro de él.

2) Medios Sólidos, permiten el aislamiento, la identificación y la diferenciación de los microorganismos, es el tipo de medio más empleado en cualquier laboratorio con fines muy variados, por las características tanto en contenido, por manejo, como por la facilidad de efectuar en ellos la morfología colonial.

3) Medios Semisólidos, es un tipo de medio que se emplea para conservar por largos periodos de tiempo a las cepas en ellos depositadas.

En cuanto a su composición química y sus usos se pueden dividir en :

• Medios simples
• Medios especiales o enriquecidos
• Medios diferenciales y selectivos
• Medios sintéticos

Medio Simple :El medio de agar se maneja fácilmente en estado líquido, también puede permitirse que solidifique en tubos de ensayo mantenidos en posición casi horizontal, formando así una superficie inclinada extensa para poder sembrar y se llama Agar Inclinado o de Tope Inclinado.

Medios especiales

Ejemplos de los medios especiales o enriquecidos son los que se hacen con suero sanguíneo coagulado (como el medio de suero de Leoffler para Bacilos Diftericos), o mezclas coaguladas de glicerina y huevo (medio de Lowenstein Jensen, para Bacilos de tuberculosis). Y los que se preparan enriqueciendo caldo o agar simples con la adición de carbohidratos, sangre (agar sangre), suero sanguíneo, caseína digerida, extracto de levadura u otra sustancia nutritiva especial.

Medios diferenciales y Selectivos

Para el cultivo primario los bacteriólogos a veces utilizan un medio preparado de modo que ponga de manifiesto las diferencias, cuando se inicia el desarrollo, entre aquellos organismos que queremos estudiar y otros gérmenes que puede haber.

Medios que son selectivos para Stafiilococos, por ejemplo el medio Staphylococcus N. 110 (S-110); para hongos, agar-dextrosa de sabouraud de ph 5,6, para Spirilos del Cólera, caldo de peptona alcalina, etc.

Con frecuencia se añade penicilina, Streptomicina, ácitidiona u otro antibiótico adecuado para evitar el desarrollo de gérmenes indeseables, mientras crecen libremente las especies que nos interesan.

Medios sintéticos

Para hacer estudios precisos de nutrición y metabolismo se utilizan soluciones nutritivas, repetibles a partir de una mezcla de sustancias químicamente conocidas, planeada cuidadosamente.

Objetivo

• Conocer los diferentes métodos de aislamiento de microorganismos a partir de diferentes tipos de medios de cultivos.
• .   Conocer las principales sustancias nutritivas para facilitar el crecimiento de microbios.
• Conocer los medios de cultivo según su consistencia y para que se utiliza cada uno

Material

Mechero

Asa bacteriológica

Lápiz graso

Un tubo con caldo nutritivo

Un tubo con agar simple inclinado

Un tubo con medio de SIM

Una caja de Petri con agar nutritivo

Una caja de Petri con agar sangre

Una caja de petri con agar Staph 110

Hisopos estériles

Gradilla

Cepas ….. Staphylococcus aureus

                  Klebsiella pneumoniae

                  Pseudomonas sp.

Desarrollo

1)SIEMBRA EN MEDIO INCLINADO

• Esterilizar el asa en el mechero y dejar enfriar.
• Flamear ligeramente las bocas de los tubos
• Introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar una asada de la cepa Staphylococcus aureus.
• Sembrar el tubo de agar inclinado por estría superficial, en ligeros movimientos de Zig zag.
• Esterilizar el asa nuevamente.
• Incubar a 37°C

2) SIEMBRA EN CALDO NUTRITIVO

• Repetir pasos señalados en punto 1
• Sembrar agitando brevemente el asa dentro del tubo. Emplear Staphylococcus aureus.

 3) SIEMBRA POR PICADURA

• Repetir pasos punto 2
• Enderezar la punta de la asa
• Meter y sacar el asa por el mismo lugar para que la picadura sea lo más recta posible.
• Emplear el medio de SIM, así como de la cepa de Klebsiella pneumoniae.

4) Siembra en cajas de Petri por el método de ESTRIA CRUZADA

• Esterilizar asa
• Tomar muestra de Pseudomona sp. con el asa y trazar una serie de zigzag muy cerrados a todo lo largo del sector 1, cuidando de abrir y cerrar la caja solo al momento de trazar
• Esterilizar el  asa y sin volver a tomar inóculo , trazar un Zig zag más abierto, en el segundo cuadrante, invadiendo al sector 1 solo en las primeras líneas pero no en las últimas
• Esterilizar el asa y repetir en cuadrante 3 el paso anterior invadiendo sector 2.
• Esterilizar el asa e incubar a 37°C por 24-48 hrs

En la caja de Petri con agar sangre, sembrar también por el método de estría cruzada, seguir los mismos paso solo que en el primer cuadrante la inoculación será con un hisopo, tomando la muestra de cavidad oral.

En la caja de Petri con agar S-110 por estría cruzada siembra del cultivo Staphylococcus aureus.

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