Laboratorio de Inmunología EJERCICIO EXPERIMENTAL
Enviado por ARELLY PACHECO • 23 de Abril de 2018 • Prácticas o problemas • 938 Palabras (4 Páginas) • 221 Visitas
Fecha de entrega: 06/Noviembre/2017
Laboratorio de Inmunología General Grupo: 2 Equipo: 9
EJERCICIO EXPERIMENTAL No.
Determinación del porcentaje de linfocitos T cooperadores y citotóxico en sangre periférica mediante Citometría de Flujo Multiparamétrica
OBJETIVO
A partir de una muestra de sangre periférica mezclada con anticuerpos marcados con fluorocromos se determinará el porcentaje de linfocitos T cooperadores y citotóxicos, así como de linfocitos B y células NK mediante Citometría de Flujo Multiparamétrica.
RESULTADOS
El equipo 9 trabajó con la Muestra 1 y realizó la tinción A, para determinar si hay linfocitos T cooperadores y citotóxicos en una suspensión celular.
Imagen | Interpretación |
[pic 1]Figura 1 | Sobre el eje X se tiene el tamaño de las células, mientras que en el eje Y se tiene la complejidad celular. De acuerdo a la Figura 1 podemos ver que los linfocitos al ser pequeños y poco complejos se encuentran en la parte inferior izquierda con un 35.8%, mientras que los granulocitos a pesar de ser pequeños tienen una mayor complejidad, por lo que se observan en la parte superior con un 47.2%, por su parte, los monocitos no son demasiado complejos y tienen un tamaño grande comparado con el de las demás células siendo 3.32%. |
[pic 2] Figura 2 | En el eje X Comp FL3-H, identifica anti-CD45 por el marcador PerCP y en el eje Y SSC-H complejidad celular. Se observa que los granulocitos, seguidos de los monocitos y de los linfocitos son los más complejos celularmente. Los granulocitos son los que menos expresan CD45, los monocitos lo expresan un poco más,mientras que los linfocitos son los que más expresan este antígeno de superficie celular. Hay un 51.5% de granulocitos, 6.01% de monocitos y 33.6% de linfocitos. |
[pic 3] Figura 3 | Sobre el eje X se encuentra el Canal FL1-H, en donde se identifica anti-CD3 mediante el marcador FitC-T; sobre el eje Y se encuentra el canal FL2-H, donde se identifica anti-CD8 mediante el marcador PE-Tc. De acuerdo a la Figura 3 en Q2 tenemos marcadas células CD3+ y CD8+, es decir, se tienen linfocitos T citotóxicos en un 27.2%. En Q3 se tienen células CD3+ y CD8- que corresponde a linfocitos T cooperadores con un 44.7%. En Q4 se muestran células que no son linfocitos T con un 23.2% al ser CD3- y por lo tanto tampocolinfocitos T citotóxicos al ser CD8-. En Q1 se observa un porcentaje de 4.95% el cual corresponde a CD8+ y CD3-, siendo resultado de un traslape de señales ya que no pueden haber linfocitos T citotóxicos sin ser CD3+. %CD3 TOTALES= 44.7+27.2= 71.9 %LINFOCITOS CITOTÓXICOS= 27.2 |
[pic 4] Figura 4 | Sobre el eje X se encuentra el Canal FL1-H, en donde se identifica anti-CD3 mediante el marcador FitC-T; sobre el eje Y se encuentra el canal FL4-H, en donde se identifica anti-CD4 mediante el marcador APC-Th. De acuerdo a la Figura 4 en Q6 tenemos marcadas células CD3+ y CD4+, por lo tanto aquí se pueden observar a los linfocitos T cooperadores en un 42.1% dentro de la muestra. En Q7 se observa CD3+ y CD4-, por lo que se trata de linfocitos T citotóxicos, que se encuentran en un 28.5%. En Q8 podemos observar que se trata de doble negativo, es decir en un 29.0% se encuentran presentes células que no pertenecen a CD3 y por lo tanto tampoco a CD4. Por último en Q5 se observa un CD3- y CD4+ con un 0.39%, lo cual puede deberse a un traslape de señal dándonos falsos positivos. %LINFOCITOS HELPER= 42.1 |
Fluorocromo marcador | Ac expresado | Canal | Linfocito T cooperador | Linfocito T citotóxico |
FitC | CD3 | FL1 | + | + |
PE | CD8 | FL2 | - | + |
APC | CD4 | FL4 | + | - |
PerCP | CD45 | FL3 | + | + |
Fluorocromo marcador | Ac expresado | Canal | Linfocito B | Célula NK |
APC | CD19 | FL4 | + | - |
PE | CD16/CD56 | FL2 | - | + |
FitC | CD3 | FL1 | - | - |
PerCP | CD45 | FL3 | + | + |
ANÁLISIS DE RESULTADOS
[pic 5]
Por medio de la citometría de flujo se determinó el porcentaje de linfocitos T cooperadores y citotóxicos, así como el tamaño celular relativo. Esta técnica representa un método rápido objetivo y cuantitativo de análisis de células, núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras partículas en suspensión. El principio en el que se basa esta tecnología es hacer pasar células u otras partículas en suspensión alineadas y de una en una por delante de un haz luminoso. La información producida puede agruparse en dos tipos fundamentales: la generada por la dispersión de la luz y la relacionada con la emisión de luz por los fluorocromos presentes en la célula o partícula al ser excitados por el rayo luminoso. Las señales luminosas detectadas se transforman en impulsos eléctricos que se amplifican y se convierten en señales digitales que son procesadas por una computadora.
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