Laboratorio

UNIVERSIDAD GALILEO

FACULTAD DE BIOLOGIA, QUIMICA Y FARMACIA (FABIQ)

LICENCIATURA EN ALIMENTACIÓN Y NUTRICIÓN (LAN)

CURSO: laboratorio de Microbiología Básica

CICLO: 3er ciclo

PRACTICA No5.

TINCION ACIDO ALCOHOL RESISTENTE

Se ha demostrado que algunas bacterias contienen un alto porcentaje de sustancias lipidicas o cerosas en aproximadamente el 60% y bajo contenido de peptidoglicano, que se tiñen con dificultad pro los procedimientos usuales, y que una vez teñidas retienen el colorante rojo aún cuando se les lave con alcohol-acido. De ahí que les llama bacterias ácido-alcohol-resistente (BAAR) después de la decoloración se adiciona azul de metileno como colorante de contraste y cualquier material que no es ácido alcohol resistente se coloreara de color azul.

Esta es una excelente coloración diferencial que se sutiliza principalmente para la identificación de Mycobacterium tuberculosis (agente causal de tuberculosis) y M. lepreae (agente causal de lepra). Estas bacterias en su membrana poseen ácidos grasos, ceras y complejos de lípidos, además de proteínas y una variedad de polisacáridos a los cuales se les atribuye su especificidad antigénica.

MATERIAL

• Frotes con extendido de esputo previamente fijados (bacilos muertos)

• Carbol fucsina de ZN

• Alcohol-ácido (95% de alcohol etílico 95% y 3% de HCl V/V)

• Solución azul de metileno de Loeffler

• Alambres de algodón

• Alcohol de quemar

PROCEDIMIENTO

ZIEL-NEELSEN

1. tome el frote y fijar a la llama varias veces

2. colocar la lámina sobre el soporte de alambre, cubrirla totalmente con el colorante de ZN y calentarla cuidadosamente durante 3-5 minutos, obteniendo una pequeña preparación. Agregar más colorante, si éste se secara durante el calentamiento.

3. lavar con agua de chorro y eliminar el exceso de agua.

4. decolorar con alcohol-ácido durante 15-20 seg

5. lavar con agua.

6. cubrir con azul de metileno durante un minuto.

7. lavar con agua del chorro, escurrir, secar y observar la lámina con el objetivo de inmersión

RESULTADO

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