METABOLISMO Y PATOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA DE LABORATORIO ENZIMAS II
Enviado por Camilo Cuatin Gutierrez • 12 de Noviembre de 2016 • Informes • 869 Palabras (4 Páginas) • 340 Visitas
METABOLISMO Y PATOLOGÍA MOLECULAR
PRÁCTICA DE LABORATORIO
ENZIMAS II
Estudiantes
Sebastián Chávez: 1628532
Camilo Cuatin: 1630717
Enrique Estrella: 1532488
GRUPO N° 1
Profesor
Martha Solórzano
8 de Noviembre de 2016
La cinética enzimática se define como el estudio de las velocidades de reacción y los principios que permiten comprender cómo suceden las reacciones utilizada en diferentes laboratorios como herramienta importante en el diagnóstico y monitoreo del tratamiento de diversas enfermedades.
PROCEDIMIENTO
Se pasó a marcar 5 tubos con los respectivos números, luego se procedió a calibrar el espectrofotómetro con el blanco a 405 nm, contiguo a esto se pre incubaron los tubos según las sustancias como se muestran en las tablas de la guía a 37 o C en un tiempo de 3 minutos, posteriormente se le agrego el extracto enzimático y se mezcló durante 5 segundos. En último lugar se incubaron los tubos a 37 o C durante 3 minutos y se pasó a leer la absorbancia a 405 nm.
RESULTADOS
Tabla 1. EFECTO DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO
SOLUCION | TUBO (ml) | |||||
Blanco | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
Agua destilada | 2.7 | 1.35 | 1.3 | 1.2 | 1.1 | 0.8 |
Buffer pH 9.6 | 0.3 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
pNFP 1 mM | - | 0.05 | 0.10 | 0.20 | 0.30 | 0.60 |
Enzima FAL | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
Absorbancia | 0 | 0.049 | 0.060 | 0.223 | 0.247 | 0.492 |
CONCENTRACION DE PRODUCTO FORMADO EN CADA TUBO
[pic 1] | [pic 2] |
[pic 3] | [pic 4] |
[pic 5] | [pic 6] |
[pic 7] | [pic 8] |
[pic 9] | [pic 10] |
VELOCIDAD REACCIÓN
[pic 11] | [pic 12] |
[pic 13] | [pic 14] |
[pic 15] | [pic 16] |
[pic 17] | [pic 18] |
[pic 19] | [pic 20] |
FALTA GRAFICA
- Calcule el Km y la velocidad máxima para esta enzima. Anexe sus cálculos de manera clara en una hoja de papel cuadriculado
Km= V=
- Explique cómo es la afinidad de la enzima por el pNFP.
R// por lo mostrado en la gráfica, la afinidad de la enzima es directamente potencial a la cantidad de sustrato obtenido, ya que nos arroja una parábola ascendente sin mucha alza de los valores del producto, lo que podría clasificarse como una reacción de primer orden. De acuerdo a la gráfica que nos dé, acomodar
Tabla 2. EFECTO DEL FOSFATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
SOLUCION | TUBO (ml) | |||||
Blanco | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
Agua destilada | 2.7 | 1.5 | 0.4 | 0.1 | 0.3 | - |
Buffer pH 9.6 | 0.3 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
Fosfato 0.1M | - | - | 0.3 | 0.60 | - | 0.3 |
pNFP 1 mM | - | 0.7 | 0.7 | 0.7 | 2.1 | 2.1 |
Enzima FAL | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
Absorbancia | 0 | 0.096 | 0.060 | 0.095 | 0.027 | 0.044 |
- Con los resultados anteriores explique qué tipo de inhibición se presenta con adición del fosfato.
R// Se puede inferir que el fosfato funciona como un agente inhibidor ya que el sustrato disminuye.
- Mencione ¿cuantos tipos de fosfatasas hay en suero y cuál es su valor normal?
Valores normales:
- Fosfatasa alcalina:
Adultos: de 25 a 100 unidades por litro (U/L) o 0,43-1,70 microkat/litro (mckat/L).
Niños: Menos de 350 U/L o menos de 5,95 mckat/L.
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