Meidición biomasa

La cuantificación de la concentracion celular en un medio de cultivo es esencial para la determinación de la cinética y estequiometria del crecimiento microbiano. Los métodos usados en la cualtificacion de la cocnentración celular puede ser clasificada en dos categorías: métodos directos e indirectos. In muchos casos, los métodos directos no son factibles debido a la presencia de solidos suspenditos o otros compuestos que interfieren. Cualquiera de los dos numero de celular o masa celular puede ser cuantificado dependiendo del tipo de información necesaria y las propiedades del sistema. La la concentracion de masa celular es a menudo peferida a la medida de la densidad del numero de células cuando solo uno es medido, pero la combinación de loas dos medidas es a menudo deseable.

En este método una cuadricula calibrada es colocada en la cámara de cultivo y se cuenta el numero de celular por cuadrado usando un microscopio.

Las muestras de células son diluidas y sembradas en la superficie de una placa de agar seguida de un periodo de incubación. Los resultados son expresados en términos de unidades formadoras de colonia. Este método  es mas adecuado si para bacterias y levaduras y menos adecuado para mohos.

Este método esta basado en la resistencia eléctrica de las células. Los contadores de partículas comerciales emplean dos electrodos y una solución electrolítica. Un electrodo es colocado en un tubo conteniendo un orificio. Un vacio es aplicado  en el interior del tubo el cual causa en la solución electrolítica conteniendo la células a ser aspiradas atraves del orificio. Un potencial eléctrico es aplicado a través de los electrodos. Las células pasan a travves del orificio, la resistencia eléctrica incrementa y causa pulsaciones en el voltaje eléctrico. El numero de pulsasiones es una medida del numero de partículas: la concentracion es conocida desde que el contador es activado por un volumen determinado de muestra.

El número de partículas en solución puede determinarse a partir de la medición de

la intensidad de la luz dispersada con la ayuda de un fototubo (nefelometría) .

Determinacion de masa celular.

Métodos directos

Peso seco: es el mas utilizado y es aplicado solo para células que se encuentran solidas libres de medio. La muestra del caldo de cultivo es centrifugado o filtrado y lavado con una solución amortiguadora o agua. Las células húmedas es secada a 80°C por 24 horas y luego se pesan.

Volumen de células empacadas: es usado  rápidamente para estimar la concentracion de células en un caldo de fermentación. El caldo de fermentación es centrifugado y tapado en un tubo graduado bajo condiciones estándar (rpm y tiempo) y el volumen de células es medida.

Espectrofotometría: es un método rápido basado en la absorción de la luz por las células suspendidas en la muestra de medio de cultivo. La intensidad de la luz transmitida es medida usando un espectrofotómetro. La medida de la turbidez o la densidad óptica del medio de cultivo provee una rápida, barado y un método simple para estimar la densidad celular. Se suelen manejar longitudes de onda de 600-700 nm además tiene que construirse una curva de calibración y utilizar como blanco el medio de cultivo sin células. Muchas curvas de calibración pueden ser no lineales a valores mayores de 0.3 de densidad óptica y depende del estado fisiológico de las células.

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