Metodo lowry bradford.
Enviado por Sardukar • 15 de Noviembre de 2016 • Documentos de Investigación • 509 Palabras (3 Páginas) • 467 Visitas
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Materiales y Métodos
La práctica comenzó con la realización de las soluciones necesarias de proteínas y reactivos para el método, una vez preparadas se realizó la mezcla en una serie de 6 tubos por duplicado de acuerdo a las especificaciones del manual, también para el tubo tres se realizaron 10 repeticiones por el mismo analista para la validación del método. De la misma manera se prepararon 5 tubos agregando sustancias interferentes, una vez que todos los tubos estaban listos fueron sellados con plástico autoadherente y fueron mezclados por inversión después se permitió el desarrollo de color durante 10 min entonces se leyó todos los tubos a 595nm realizando las anotaciones necesarias y se realizaron las gráficas indicadas.
Los residuos fueron colocados en un envase etiquetado para su futuro tratamiento.
Resultados
Tabla 1: Curva de calibración de albúmina. Método de Bradford
Tubo No. | Cantidad de proteína (μg) | A595 | Serie ajustada por regresión lineal | |
Serie a | Serie b | |||
1 | 25 | 0.215 | 0.256 | 0.331 |
2 | 50 | 0.406 | 0.429 | 0.421 |
3 | 75 | 0.524 | 0.542 | 0.511 |
4 | 100 | 0.595 | 0.603 | 0.601 |
5 | 125 | 0.683 | 0.697 | 0.691 |
La curva fue realizada con los valores ajustados y se obtuvo una ecuación para esta recta de la cual podemos obtener la pendiente (b) y la ordenada al origen (a). y= bx + a y= 0.0036x + 0.241 También se obtuvo el coeficiente de correlación r2= 0.9995.
Estos datos permiten la interpretación de la curva de calibración b nos da la sensibilidad del método mientras que a es un valor constante que se relaciona al valor del blanco y la r2 nos permite ver la reproducibilidad de los datos depende del analista que realice la curva.
Esta metodología cumple la Ley de Bourger-Beer al observar la tendencia creciente entre absorbancia y concentración, además podemos determinar que los límites de la proteína estando entre 25-125 microgramos.
Con el valor de la pendiente podemos obtener el factor de calibración que es Fc= 11.1, la condición para poder usar este factor es que la curva de calibración inicie en cero.
Tabla 2: Réplicas para el análisis estadístico
Tubo No. | A595 | Cantidad de proteína (μg) |
Albúmina | ||
1 | 0.506 | 73.61 |
2 | 0.549 | 85.55 |
3 | 0.519 | 77.22 |
4 | 0.546 | 84.72 |
5 | 0.526 | 79.16 |
6 | 0.546 | 84.72 |
7 | 0.520 | 77.50 |
8 | 0.544 | 84.16 |
9 | 0.552 | 86.38 |
10 | 0.520 | 77.50 |
Con estos datos podemos realizar un análisis estadístico para obtener los siguientes datos, la media x= 81.052, la desviación estándar s=4.29, la varianza s2= 18.40, el coeficiente de variación CV= 5.2% y los límites de confianza media μ 95% = límite menor 77.982 y límite mayor 84.122.
Comparando los datos del método de Lowry y Bradford mediante un análisis de T student demuestra que no hay una dieferencia signficativa.
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