Metodos De Permeabilizacion

METODOS DE PERMEABILIZACION

Los métodos de permeabilización concisten en alterar la estructura de la pared y de la membranacelular, para facilitar la difucion del producto hacia el exterior de la celula.

Hay distintos métodos y materiales para conseguir o permeabilizar la membrana celular los cuales pueden ser físicos o químicos. Entre los métodos químicos encontramos la ampliación de solventes orgánicos para permeabilizar las células.

DILUCION LIPIDICA

La extracción por solvente ha sido usada para la disolución selectiva de ciertos componentes celulares, sin embargo su uso es limitado debido a que pueden inhibir severamente las actividades biológicas. La técnica de disolución lipídica es relativamente fácil, se le añade a la suspensión celular un volumen de tolueno aproximadamente igual al 10 % de la biomasa. El tolueno es absorbido dentro de los lípidos de la membrana celular, lo que produce la expansión de esta y su posterior ruptura. El contenido celular es liberado y entonces puede ser separado el producto de interés.

Otros tipos de solventes además del tolueno también son efectivos para este propósito. El benceno es efectivo pero es carcinogénico y altamente volátil. El tolueno también es carcinogénico pero este es menos volátil. En la práctica los solventes con similares parámetros de solubilidad atacaran a las células en forma similar.

Idealmente se deben seleccionar solventes cuyos parámetros de solubilidad Sean apropiados para los lípidos de la membrana celular, pero inadecuados para disolver el producto de interés localizado dentro de la celula. Esto casi nunca se conoce por eso es necesario realizar experimentos.

DIGESTION ENZIMATICA

La digestión enzimática consiste en el empleo de enzimas que atacan la membrana o la pared celular y provocan el rompimiento de estas. Una de las enzimas mas utilizada para la digestión enzimática de bacterias es la lisozima. Esta enzima rompe el enlace Beta, 1-4 entre el acido N-acetilmuramico y la N-acetil glucosamina de la capa de peptidoglucano de la pared celular, provocando el rompimiento de la pared y consecuentemente la ruptura de la célula. A pH’s menores que 5 la célula no se rompe aun cuando la pared celular haya sido destruida por digestión . esto se debe a la baja solubilidad del protoplasma a estos pH’S y enfatiza la necesidad tanto de rompimiento de la pared celular como de condiciones favorables de solubilidad, para una liberación eficiente de los materiales intracelulares.

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