Microbiologia
Габриэла Летучая Мышь КрысаResumen10 de Septiembre de 2015
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PREVIO MEDIOS DE CULTIVO
Se define a un medio de cultivo como el material nutritivo en el que se pueden recuperar, multiplicar y aislar los microorganismos, así como efectuar pruebas de susceptibilidad. Generalmente se presenta desecado en forma de polvo fino o granular, aunque puede presentarse también hidratado y preparado.
INGREDIENTES DE UN MEDIO DE CULTIVO
- Agar: se obtiene a partir de algas marinas, tiene propiedades gelificantes a 35-40°C y un punto de fusión de 80°C. Químicamente es una mezcla de los polisacáridos agarosa (75%) y agaropectina (25%) y se trabaja a una concentración de 1.5% m/v para medios sólidos y menor a 1% m/v para medios semisólidos. Su estructura le confiere gran estabilidad frente a enzimas microbianas por lo que actúa como material inerte.
- Hidrolizados de proteínas: Se obtienen por la hidrólisis ácida de una proteína animal, los extractos de carne o medios comerciales deshidratados facilitan su utilización.
Tabla 27 PEPTONAS UTILIZADAS EN LA PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
PEPTONA | CARACTERISTICAS | USO |
P. de carne | Digerido de tejidos animales con alto contenido de azufre. | Pruebas de formación de sulfuro de hidrógeno. |
P. de Caseína | Digerido pancreático de caseína, contiene triptófano (para producción de Indol), fermenta carbohidratos y reduce nitratos. | Cultivo de organismos de difícil crecimiento, pruebas de potencia de antibióticos. |
P. de Caseína H | Hidrolizado ácido de caseína por HCl, contiene bajo contenido en triptófano y cisteína. | Determinación de vitaminas. |
P. de soya | Digerido papaiínico de soya, contiene alto contenido en carbohidratos. | Cultivo de múltiples microorganismos pero no usar en pruebas de fermentación. |
Polipeptona | Combinación de peptona de caseína con peptona de carne, contiene vitaminas (Tiamina). | Cultivo de múltiples microorganismos. |
- Técnica de dilución americana.
Con el asa estéril se hace un inoculo primario haciendo extensiones en la placa de orilla a orilla (1). Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensión anterior en otra dirección en forma de estrías (2). Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensión en otra dirección. Esterilizamos y repetimos la operación (3 y 4).[pic 1]
Incubamos a 37 º durante 24 horas y, en la primera zona, habrá un crecimiento abundante de colonias bacterianas. En la última estría el numero de colonias será mínimo.
[pic 2]
Si tomamos una colonia de la zona de la última estría y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.
- Sembrado masivo: Consiste en colocar un inoculo inicial en el centro y a lo largo del agar (con hisopo). Después se estría a lo ancho de la caja en ángulos rectos cercanos, se rota la caja y se estría de igual forma. Toda la caja deberá estar estriada por igual; favoreciendo el crecimiento uniforme.[pic 3]
[pic 4]
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