Microscopio. CLASES DE MICROSCOPIO

MICROSCOPIO

INTRODUCCIÓN

El microscopio es el instrumento más frecuentemente utilizado y el más útil en el laboratorio de microbiología. Este proporciona la amplificación  o agrandamiento aparente que nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista, con una amplificación desde cien a cientos de miles de veces.

CLASES DE MICROSCOPIO

MICROSCOPIO ÓPTICO:

En este microscopio la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto significa que existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del objetivo y del ocular hasta llegar a formar la imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio más habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz. El aumento máximo que se puede obtener con este tipo de microscopio alcanza alrededor de 1500x.

[pic 1]

Esto es sangre de rana observada al microscopio óptico, como se puede apreciar, se observa un núcleo bien diferenciado (lo morado) y el citoplasma (rosado)

MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO:

Permite la observación de pequeños objetos lo cual depende principalmente del poder de resolución de sus objetivos. En este tipo de microscopio los objetos aparecen oscuros en un campo iluminado; las bacterias en fresco no se ven con mucha facilidad y su morfología grosera puede ser apreciada empleando  colorantes básicos; las cápsulas y flagelos que están por debajo del poder de resolución del microscopio óptico pueden ser observados empleando colorantes apropiados que se adhieren a dichas estructuras y aumenten su tamaño.

[pic 2]

Paramecium a un aumento de 1000x. La microscopía de campo claro permite observar la forma y las estructuras internas de mayor tamaño, como el núcleo.

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO:

El microscopio de campo oscuro se utiliza para analizar partículas pequeñas, que presentan muy escaso contraste con la microscopia óptica o que se encuentran en el límite del poder de resolución o por debajo de éste. Para la microscopia de campo oscuro se emplea un condensador especial, esta clase de condensador dirige los rayos de luz dentro del campo de la muestra, formando un ángulo tal, que solo los rayos que chocan contra el objeto que hay en el campo de la muestra son refractados (curvados) y penetran en el objetivo. Así, el objeto queda brillantemente iluminado y destaca sobre el fondo oscuro.

[pic 3]

Paramecium (1000x) .La microscopía de campo oscuro revela la presencia de cilios.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES:

En este tipo de microscopio  se aumentan las pequeñas diferencias en la refracción provocadas por las subestructuras bacterianas permitiendo la observación de bacterias vivas así como detalles de su estructura (cápsulas, endosporas, partículas citoplasmáticas y pared celular). El sistema de contraste de fase está constituido por dos anillos o discos de fases, uno en el diafragma que permite el paso de un anillo de luz hacia el objetivo y otro en el objetivo que permite que la luz incidente del condensador tenga un cambio de fase de ¼ de longitud de onda. Al pasar la luz incidente del condensador a través de una bacteria las subestructuras reflejan, refractan y difractan los rayos luminosos, algunos de los rayos pasan por el disco de fase del objetivo e interactúan con los rayos procedentes del condensador produciéndose un espectro luminoso, otros rayos no pasan por el disco de fase e interfieren con los rayos del condensador produciéndose un espectro oscuro.

[pic 4]

Paramecium (1000x) La imagen de contraste de fases muestra mayor detalle interno, y el característico halo.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA:

Emplea como fuente de luz rayos ultravioletas, varios filtros y un condensador de campo oscuro. Se usa para examinar muestras teñidas con colorantes de fluorocromo (auramina, rodamina, naranja de acridina, etc.) denominados fluorescentes, los cuales absorben luz de una determinada longitud de onda y emiten una radiación luminosa de longitud de onda mayor permitiendo que los objetos se observen brillantes, autoluminosos o con gran claridad. Esta técnica permite la identificación rápida de algunos microorganismos.

...