PLASMIDO, BIOTECNOLOGIA

pBR322

El mapa genético y físico de pBR322 da una indicación de por que este plásmido era un vector de clonación tan popular.

La primera característica útil es su tamaño, ya que para que un vector de clonación debería de ser de menos de 10 kb de tamaño, para evitar problemas tales como el rompimiento del DNA durante la purificación. pBR322 tiene 4363 pb, lo cual significa que no sólo puede ser el vector purificado por sí mismo con facilidad, pero también puede con moléculas recombinantes de DNA construidas con él. Incluso con 6 kb de DNA adicional, un pBR322 recombinante es una molécula de tamaño manejable.

La segunda característica es que contiene dos conjuntos de genes de resistencia antibiótica. Las resistencias a ampicilina y la tetraciclina pueden ser usadas como un marcador seleccionable de células que contienen el plásmido, y cada marcador de gen incluye un único sitio de restricción que puede ser usado en experimentos de clonación. La inserción de DNA nuevo dentro del pBR322 que ha sido restringida con Pst1, Pcu1 o Sca1 inactiva el gen amp, y la inserción usando cualquier tipo de ocho endonucleasas de restricción, inactiva la resistencia a la tetraciclina. Esta gran variedad de sitios de restricción que puede ser usada por inactivación insercional, quiere decir que pBR322 puede ser usada para clonar fragmentos de DNA con cualquiera de varios tipos de fin con corte asimétrico.

Una tercera ventaja de pBR322 es que tiene un razonablemente alto número de copias. Generalmente hay alrededor de 15 moléculas presentes en una célula de E. coli transformada, pero este número puede ser incrementado, hasta 1000-3000, por amplificación de plásmido en presencia de un inhibidor de síntesis de proteína tal como el clorafenicol. Por lo tanto, un cultivo de E. coli ofrece un buen rendimiento de moléculas de pBR322 recombinante.

pJQ210

Posee un tamaño de 6700 pb. Es un vector suicida que permite el reemplazamiento de genes y la movilización dentro de un amplio número de bacterias Gram negativas. Permite la selección positiva para la integración. Se replica solo en enterobacterias, y varias de sus funciones como vector suicida en otras bacterias hospedadoras Gram negativas. Cuando se induce en un medio que contiene 5% de sacarosa, SacB es letal en un amplio rango de bacterias Gram negativa, y así permite la selección por pérdida del vector. Un sitio sencillo de BglII dentro de la resistencia a la gitamicina (GtmR) permite la inserción de otros genes de resistencia. El orden de las principales características de el plásmido es gtmR – SmaI – P15A – cos – traJ – oriT – SacB.

Bibliografía

Gene cloning and DNA analysis: an introduction. Terence

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