PRACTICA DE TINCIÓN DE GRAM

PRACTICA DE TINCIÓN DE GRAM

        Para hacer la tinción de Gram, primero hay que hacer un

FROTIS BACTERIANO.

        Para ello se extiende una pequeña cantidad de cultivo sobre un porta objeto (seco y limpia) y posteriormente se fija.

        Se pondrá 1 pequeña gota de agua destilada en el porta y con el asa de siembre se coge una colonia y se extiende sobre el porta.

        A continuación se fija con un mechero Bunsen pasando el porta (con una pinza) sobre la llama y así el calor seco secará la gota.

        Una vez hecho el frotis se puede hacer la tinción de Gram.

        Esto dividirá la bacterias en:

• Gram (+) – Compacta simple
• Gram (-) – Menos compacta pero más COMPLEJA.

TINCIÓN GRAM

1.- PRIMER COLORANTE – CRISTAL VIOLETA (+).

        Cogeremos un cristalizador. Se pone el puente soporte y pondremos los portas a teñir y a continuación se echará el Cristal Violeta con una Pipeta Pasteur.  

        Los protocolos suelen decir que hay que esperar 30”, pero como nuestras colonias son un poco viejas, lo dejaremos 90”.

        Este colorante es básico, con carga + con lo cual el péptido-glicano.

2.- MORDIENTE – LUGOL.

        Fijará bien las tinciones de el cristal violeta a las estructuras de las y aumentará la afinidad entre el colorante y las células.

        El Lugol lo dejaremos actuar 60”.

        Se vuelve a lavar un poco y después

3- AGENTE DECOLORANTE – Alcohol- Acetona 1:1

        Es disolvente orgánico. Elimina el cristal violeta no fijado a las estructuras. En las Gram (-) negativas arrastrará el cristal violeta. LAS LIMPIARA y en las Gram (+) No les hará nada ya que ya está fijado el cristal violeta.

        A LOS 30” se vuelve a lavar para retirar el decolorante.

4.- SEGUNDO COLORANTE – SAFRANINA.

        Es el colorante básico que se fijará a la estructura sin colorante. Es decir, nos teñirá las GRAN (-).

...