LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA PRACTICA #2 TINCIÓN DE GRAM

OBJETIVO

El objetivo de práctica es poder observar en el microscopio los diferentes tipos de bacterias  y también así poder poner en práctica el método de tinción de Gram

INTRODUCCIÓN

Tinción de Gram

La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias. Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias, sino también para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar el antibiótico más adecuado para tratarla.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram negativas.

Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificación de la amplía mayoría de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma diferente a cada tipo de antibióticos, por eso es una técnica útil para seleccionar el fármaco antimicrobiano inicial ante una infección. Hay que tener en cuenta que en ciertas situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento antibiótico adecuado de forma precoz, por eso la tinción de Gram se pide de urgencia en muchas ocasiones. La tinción de Gram también tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen pared, como por ejemplo lasChlamidias, y no se podrán identificar, al igual que los virus. En esos casos la tinción no coloreará ningún germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infección. Para ello es necesario realizar un cultivo microbiológico que se acompaña siempre de un antibiograma para estudiar de forma exacta el antibiótico más efectivo.

MATERIALES

• Porta objetos
• Mechero
• Asa punta redonda
• Cinta
• Marcador
• Microscopio
• piseta

REACTIVOS

• Solución de cristal violeta
• Lugol
• Alcohol – acetona
• Safranina
• Muestras de bacterias

PROCEDIMIENTO Y METODO

• Lavar y secar los porta objetos y numerar del  1 al 6
• Flamear el porta objetos seco 4 veces por el mechero
• Tomar el asa bacteriológica y extenderla por el porta objetos, (repetir para cada diferente muestra en cada porta objetos).
• Dejar secar y pasarla por el mechero 5 veces sin dejar que se caliente.
• Realizar la tinción de Gram.
• Cubrir los frotis con una solución de cristal violeta (dejar colorante durante 1 min )
• Lavar los frotis baja el chorro de agua y separar uno para observar en el microscopio.
• Cubrir con lugol los 5 restantes (durante 1 min).
• Lavar y separa uno para observar en el microscopio.
• Decolorar con alcohol-acetona los 4 frotis restantes durante 10 segundos.
• Lavar y  separar uno para observar en microscopio.
• Agregar a los 3 frotis restantes safranina (dejar actuar durante 1 min).
• Lavar y observar en el microscopio.
• Se observaran las bacterias Gram positivas en violeta oscuro y las bacterias Gram negativas en rojo o rosa.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

[pic 1]

Se pudo observar en el microscopio de 100x Echerichia coli, las agrupaciones de Staphylococcus  en forma de racimos, esta bacteria se pudo observar de coloración azulada ya que es una bacteria Gram +

[pic 2]

En este frotis se puede observar una mezcla de dos tipos de tinciones Gram, en donde los bacilos se encuentran en color rosa/rojo y los cocos en color violeta oscuro.

DISCUCIÓN

1.-  ¿Por qué es conveniente realizar una capa fina al momento de hacer  el frotis del microorganismo  a estudiar?

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