Tincion De Gram

1. ¿Cuáles son las fuentes de error más comunes en la tinción de Gram?

Es importante al momento de trabajar los métodos de tinción tener tanto precaución como precisión, debido a que se pueden generar errores en los resultados. Se debe aclarar que en situaciones cuando se trabaja con colorantes, estos pueden generar precipitados (artefactos) que a su vez pueden crear confusiones, ya que toman formas similares a las de células bacterianas.

En cuanto a las fuentes de error para tinción de Gram encontramos tres factores, que son:

• Edad de la bacteria.

• Errores del operador.

• Uso y edad de antibióticos

Este método debe ser desarrollado con precaución, ya que la reacción puede variar según la edad de las células y la técnica empleada por ella. Junto a la muestra deben teñirse controles con Gram positivas y Gram negativas.

2. ¿Cuál es el fundamento de la técnica de Gram?

Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencia las bacterias a partir de las paredes celulares clasificándolas en dos grupos. Bacterias Gram positivas y Gram negativas

Ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. Ya que las bacterias Gram Positivas poseen una capa gruesa de Peptidoglicano (además de ácidos teicoicos, ácidos lipoteicoicos), mientras que las bacteria Gram Negativas poseen una capa delgada de Peptidoglicano (además de lipopolisacáridos, fosfolípidos y proteínas). La clave es el Peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y como se había dicho con anterioridad las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas.

La diferencia que se observa en la capacidad de resistencia a la decoloración, se debe a las propiedades que la membrana externa de las Gram negativas posee, siendo importante la solubilidad en solventes orgánicos, tales como la mezcla de alcohol/acetona. Para estas bacterias la capa de Peptidoglicano es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Mientras que las Gram positivas poseen una pared celular más resistente y con mayor proporción de Peptidoglicanos, estas no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, impidiendo que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.

3. ¿Por qué las bacterias Gram negativas tiñen de rosado a diferencia de las Gram positivas (morado) siendo el procedimiento de tinción el mismo?

La técnica de tinción de Gram consiste en la aplicación del colorante cristal violeta, cuya reacción con la pared celular ha permitido tradicionalmente clasificar a las bacterias en dos grupos: Bacterias Gram Negativas y Bacterias Gram Positivas.

Ahora, en cuanto al proceso se tiene que el cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El Lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo, y actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.

...