PRACTICA N°1 PREPARACIÓN DE UNA MUESTRA FIJA PARA TINCIÓN Y TINCIÓN SIMPLE CON COLORANTES BÁSICOS

PRACTICA N°1

PREPARACIÓN DE UNA MUESTRA FIJA PARA TINCIÓN Y TINCIÓN SIMPLE CON COLORANTES BÁSICOS

INTRODUCCIÓN

En la elaboración de esta práctica se ha hecho uso de la mucosa bucal, para poder ver y reconocer las células que estan en ellas. Las células epiteliales de la mucosa bucal son las encargadas de formar el tejido bucal. Estas células son planas y poseen un núcleo prominente el cual puede observarse con mayor facilidad.Todo esto a través de una muestra fija la cual antecede para el uso de tinciones. Para el uso de tinciones se han utilizado el método de frotis y los colorantes básicos.

OBJETIVOS:

• Aprender las técnicas de preparación de frotis, de fijación y coloración más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianos.
• Observar las diferentes formas, tamaños y agrupaciones que presentan los microorganismos aplicando un método simple de tinción.

Fundamentos:

El procedimiento de fijación mata al microorganismo, coagula el protoplasma celular y provoca su adhesión a la lámina de vidrio .Un agente de fijación ideal preserva la estructura de la célula en la forma y posición normal sin causar la aparición de artefactos. Aunque el calentamiento es el agente de fijación más común, el alcohol y otros agentes químicos también pueden ser usados satisfactoriamente.

La tinción simple construye una técnica sencilla y directa que a través del uso de un colorante, nos permite contrastar y diferenciar los microorganismos de su entorno.

Los colorantes básicos, los cales se utilizan comúnmente para teñir microorganismos, difieren en el grado de reactividad con las células. El azul de metileno reacciona con las células cargadas negativamente a la tasa más baja, tomando de 20 a 30 segundos para teñir apropiadamente una preparación microbiana. El cristal violeta es más reactivo y generalmente requiere sólo 10 segundos. El carbol fucsina es un colorante aún más reactivo y generalmente requiere solo 15 segundos. Su reactividad es tan grande que ciertamente puede dificultar una tinción apropiada, sobre todo cuando la muestra contiene abundante materia orgánica.

Materiales para la muestra fija

• Muestra conteniendo bacterias

• Lamina porta objeto
• Mechero de alcohol
• Piseta con agua

Materiales para la tinción simple

• Láminas fijadas de microorganismos
• Colorantes básicos: Cristal violeta, Carbolfucsina
• Piseta de agua
• Soporte para tinción

Procedimiento

1. Raspamos la mucosa bucal con un isopo y colocamos sobre la lámina por el método de frotis.
2. Lo fijamos y colocamos las láminas de microorganismos sobre el soporte para tinción.
3. Agreguamos el cristal violeta por un lapso de 1 minuto.
4. Una vez cumplido el tiempo para los colorantes, enjuagamos con agua destilada.
5. Secamos la lámina al aire o al mechero
6. Examine las preparaciones teñida (40 – 100 x) en el microscopio.

[pic 2]

Figura 1. Preparación y fijación de cultivos bacterianos.

RESULTADOS

Se observo a una resolución de 40x las células epiteliales de la mucosa bucal con algunas apariciones de material parecido a los cocos. La célula bucal estaba sin daño y se podía distinguir sus partes.

[pic 3]

Grafico 1 Mucosa Bucal a 40X

DISCUSIÓN

No se vieron gran cantidad de celulas epiteliales de la mucosa bucal. Esto puede darse debido a que en el momento de sacar la muestra no se haya hecho con mayor fuerza el raspado.

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