Practica De Laboratorio

BIOQUÍMICA GENERAL

PRÁCTICA No. 4

RECONOCIMIENTO CUALITATIVO DEL COLESTEROL POR EL MÉTODO ENZIMÁTICO

OBJETIVO: Obtener y reconocer el colesterol a partir de una muestra animal.

METODO: Identificación del colesterol por el método enzimático de Trinder.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

I. EXTRACCIÓN DE COLESTEROL DE LA YEMA DE HUEVO

- Separar la clara de la yema del huevo de gallina, cuidando de no romper esta.

- Tomar 1 g de la yema en un vaso de 150 mL

- Añadir sobre la yema 5 mL de acetona y agitar, hasta obtener una solución homogénea.

- Verter el contenido en dos tubos de centrifuga y equilibrarlos.

- Centrifugar a la máxima velocidad (6000RPM) durante 5 minutos.

- Guardar el sobrenadante que contiene el extracto acetónico del huevo de gallina (MP1).

- Repetir el mismo procedimiento pero con huevo de codorniz para obtener un nuevo extracto acetónico (MP2)

II. DETECCIÓN CUALITATIVA DEL CONTENIDO EN COLESTEROL TOTAL DE LOS EXTRACTOS.

1. Tomar 4 tubos de ensayo y rotularlos, luego agregar:

Blanco (B), Estandar (E), Extracto acetónico 1 (MP1) y Extracto acetónico 2 (MP2).

TUBOS B E MP1 MP2

Extracto acetónico de huevo de gallina -- -- 0,02mL --

Extracto acetónico de huevo de codorniz -- -- -- 0,02mL

Estándar de colesterol -- 0,02mL

(20 uL)

Medir con micropipeta -- --

Agua destilada 0,02mL -- -- --

Reactivo enzimático de

Colesterol 1,5mL 1,5mL 1,5mL 1,5mL

-Tapar los tubos con papel parafilm. Mezclar suavemente por inversión.

- Incubar a 37oC durante 5 minutos.

- Observar y comparar los colores del Estándar, Blanco y Extractos.

- Anotar los resultados.

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