Pruebas bioquímicas

Pruebas bioquímicas

Prueba TSI (Triple Sugar Iron ó Triple Azúcar Hierro)

El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. Tambien permite la identificación de la producción de SH2.

Esta es una prueba específica para la identificación a nivel de género en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre:

• bacterias fermentadoras de la glucosa

• bacterias fermentadoras de la lactosa

• bacterias fermentadoras de sacarosa

• bacterias aerogénicas

• bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgánicas que contengan azufre.

Prodedimiento:

Inocular los tubos de TSI con punta (alambre recto). Para eso introducir la punta hasta 3 a 5 mm. del fondo del tubo. Tras retirar el alambre del fondo, estriar el pico con un movimiento hacia uno y otro lado. Incubar a 35° durante 24 horas. Posteriormente se debe medir el pH de los cultivos.

Resultados:

• Pico alcalino/fondo alcalino : no hay fermentación de azucares. Característica de bactrias no fermentadoras como Pseudomonas sp.

• Pico alcalino/fondo ácido : Glucosa fermentada,lactosa ni sacarosa fermentadas. Shigella spp.

• Pico alcalino/fondo negro : Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentadas, producción de ácido sulfhídrico. Salmonela spp.

• Pico ácido/fondo ácido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o no. Escherichia coli.

A estos resultados se les agrega el resultado de la producción de gas.

Prueba LIA (Lysine Iron Agar ó Agar Lisina Hierro)

Esta prueba permite diferenciar los microorganimos que producen descarboxilación o desaminación de la lisina. Se pude detectar ademas la produccion de SH2 y es más sensible que el TSI para la detección de SH2. Es muy utilizado par descartar Salmonella de aislamientos primaros.

Procedimiento:

Inocular en forma de estría las cepas de micro organimos en el medio de cultivo e incubar por 24 horas a 37° .

Interpretación y Resultados:

Reacción Interpretación

Azul (alcalino) Hay movilidad

Rojo No hay movilidad

Engrecimiento Descarboxila ornitina

Ruptura del Agar No descarboxila

Fondo Amarillo y

Tendido púrpura Descarboxilación de lisina

SIM:

. Determinar si la bacteria a través de Triptofanasaspuede degradar el Triptófano a indol.

2. Determinar si hay producción de H2S a partir de aminoácidos azufrados

3. Determinar si la bacteria es móvil.

Tratamiento: Para Indol: 2 a 3 gotas del reactivo de Kovac

Resultado positivo: Rojo (anillo) – presencia de indol (triptófano fue degradado).

Negro (precipitado), producción de H2S

Difuminación de la bacteria hacia los lados

Resultado negativo: Amarillo, la bacteria no puede degradar el triptófano

Medio de cultivo se queda igual.

La bacteria sólo crece en la línea de inoculación

Urea:

FUNDAMENTO: La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la descomposición de los compuestos orgánicos. Por su acción desdobla la urea, liberando 2 moléculas de amoniaco. Empleamos un indicador de pH, el rojo fenol, con color amarillo en medio ácido y rosado en medio alcalino.

TECNICA: Se emplea un medio agar base con un 20% de urea. Hay que tener la precaución de no calentar, pues la urea se descompone con el calor. Por ello, este medio se debe esterilizar por filtración.

Se incuba a 37°C - 24h.

RESULTADO +: color rojo rosado del medio, que indica alcalinización por el amoniaco

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