Pruebas Bioquimicas Micologicas
Enviado por Isarcrc • 7 de Febrero de 2015 • 2.412 Palabras (10 Páginas) • 3.490 Visitas
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
LECHE TORNASOLADA
La leche con tornasol, es un medio diferencial que se emplea para determinar varias funciones metabólicas de un organismo, como la fermentación de la lactosa y a la vez identificarlo.
FUNDAMENTO.
El tornasol incorporado a la leche es un indicador de pH y de óxido-reducción. La leche por sí sola contiene lactosa y caseína lactalbúmina y lactoglobulina. Por lo tanto un organismo puede mostrar una o varias propiedades metabólicas en este medio, ayudando a su identificación, las propiedades que en este medio se observan son las siguientes:
FERMENTACIÓN DE LA LACTOSA
El tornasol como indicador de pH es rojo en un medio ácido (pH 4.5) y azul en condiciones básicas (pH 8.3). La leche tornasolada en sí, presenta color azul purpúreo y un pH de 6.8. Al inocular este medio con un microorganismo capaz de fermentar la lactosa, el medio se torna rojo rosado.
Lactosa Glucosa + Galactosa
ác. pirúvico
REDUCCIÓN DEL TORNASOL
Es un indicador de óxido-reducción y algunos organismos son capaces de reducirlo a una leucobase que en el medio se aprecia como una mancha blanca.
FORMACIÓN DE COÁGULO
La formación de un coágulo en la leche tornasolada es causada por la precipitación de la caseína, la cual se encuentra en forma de sal (caseinato de Ca) por la formación de ácidos o por la conversión de la caseína en paracaseína.
Al ser fermentada la lactosa, los ácidos que se forman, se combinan con el caseinato de calcio para dar caseinógeno produciendo un coágulo firme en las paredes del tubo y que al someterse a condiciones alcalinas se disuelve.
Lactosa Glucosa + Galactosa
ác. pirúvico
ác. láctico + caseinato de Ca caseinógeno ↓(ppdo insoluble)
INGREDIENTES
Leche descremada deshidratada 100g.
Polvo de tornasol 0.75g
Agua destilada 1000 mL
Para el indicador del pH (Tornasol)
Tornasol granulado 250g.
alcohol etílico 40% 1000 mL
INTERPRETACIÓN
Rojo rosado
reacción ácida
fermentación de lactosa
Azul purpúreo
No hay fermentación de lactosa
No hubo inóculo
Azul
Reacción alcalina
No hay fermentación de lactosa
el organismo ataca las sustancias nitrogenadas que se encuentran en el medio.
Blanco
reducción del tornasol a una leucobase
Formación del coágulo o cuajo
precipitación de la caseína
LICUEFACCIÓN DE LA GELATINA
Tiene como objetivo determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina. Estas enzimas son detectadas por la digestión o licuefacción de la gelatina presente en el medio.
El catabolismo de las proteínas por las gelatinasas es un proceso en dos etapas y el resultado final es la mezcla de aminoácidos individuales.
Proteína + H2O □(→┴█(Gelatinasas @proteinasas) ) Polipéptidos
Polipéptidos + H20 □(→┴█(Gelatinasas@polipeptidasas) ) aminoácidos individuales
Posterior a la hidrólisis, los aminoácidos separados son mezclados con una disolución de Ninhidrina y experimentan una reacción rápida produciendo un color púrpura
En esta prueba se utilizan diferentes medios, a continuación se presentan algunos:
MEDIO DE GELATINA DE KOHN (MÁS RECOMENDADO)
Ingredientes:
Gelatina nutritiva 15 g
agua corriente o destilada fría 100 mL
Carbón inactivado finamente pulverizado 3-5 g
formol 40 %
carbonato de calcio CO3Ca 1g
cloruro de sodio NaCl 0.9 g
En esta prueba la gelatinasa al licuar a la gelatina libera partículas de carbón , esta gelatina con carbón actúa como sustrato para determinar la actividad de la gelatinasa y no como medio nutritivo. Estas partículas liberadas determinan el índice de licuefacción de la gelatina.
La licuefacción se produce a los 37° C y posteriormente se licúa una pequeña cantidad de gelatina para que queden liberadas las partículas de carbón dando una prueba positiva.
INTERPRETACIÓN
1. Es POSITIVO si:
Las partículas libres de carbón se depositan en el fondo del tubo.
2. Es NEGATIVO si:
La mezcla de gelatina con carbón permanece intacta.
No se observan partículas libres de carbón en el medio.
MEDIO DE gelatina con tioglicolato pH: 7
INGREDIENTES
Casitona 15.5 g
Extracto de levadura 5 g
Dextrosa 2 g
NaCl 2.5 g
L- cistina 0.25 g
Sulfito
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