Pruebas Bioquimicas

Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Son empleadas principalmente la identificación y clasificación de bacterias y hongos.

Pruebas Bioquímicas

Se pueden resumir en los siguientes puntos: •Sustrato (contenido en el medio de cultivo) •Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del microorganismo) •Producto •Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean) E + S ↔ES ↔E + P E + S E + S ↔ ↔ES ES ↔ ↔E + P E + P

Los fundamentos completos de estas pruebas y demás información pueden encontrarlos en el libro: Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínicade Jean F. MacFaddin, Editorial Médica Panamericana .

Hidrólisis del Almidón

Agar Almidón Sustrato: Almidón (polímero de glucosa). Enzima: Amilasa (exoenzima). Producto: Glucosa. Revelador: Lugol. El lugolcon el almidón forman un complejo color café-púrpura que desaparece cuando el almidón ha sido degradado.

El almidón es producido principalmente por plantas superiores, está compuesto de amilosay amilopectina. Diversas enzimas amilolíticas hidrolizan almidón y sus productos. Prueba negativa Prueba positiva

Degradación de la caseína

Prueba negativa Prueba positiva

Agar Leche Descremada Sustrato: Caseína (proteína). Enzima: Caseinasa(Proteasa, exoenzima). Producto: Aminoácidos. Revelador: No requiere.

Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de proteínas, la caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco, cuando la caseína es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano.

Hidrólisis de la lecitina y reducción del telurito

Algunos microorganismos producen lecitinasaque hidroliza la lecitina (fosfolípido). Se utiliza el agar yema de huevo. Las colonias productoras de lecitinasaforman una zona opaca a su alrededor.

El medio de Baird Parker es empleado para el aislamiento y cuantificación de estafilococos cuagulasapositivos, al que se adicionan componentes que lo hacen selectivo. Las colonias típicas de S. aureusson oscuras por la reducción del telurito, además presentan el halo de hidrólisis de la lecitina.

Agar yema de huevo/Agar Baird Parker Sustrato: Lecitina. Enzima: Lecitinasa. Producto: Fosforilcolina. Revelador: No requiere.

Licuefacción de la gelatina

Gelatina Nutritiva Sustrato: Gelatina (proteína). Enzima: Gelatinasa(Proteasa, exoenzima). Producto: Aminoácidos. Revelador: No requiere o puede emplearse el carbón activado en polvo.

La gelatina es una proteína que tiene la capacidad de gelificar, cuando es hidrolizada por la gelatinasaen los aminoácidos que la componen pierde su característica de gelificar. Se pueden emplear varios medios que permiten la visualización macroscópica como la gelatina adherida a carbón activado.

Prueba negativa Prueba positiva

Fermentación de carbohidratos

Medio base rojo de fenol más carbohidrato o polialcohol, con campana de fermentación (Durham). Sustrato: Carbohidrato o polialcohol. Vía: Fermentativa. Producto: Ácidos orgánicos. Indicador: Cualquier indicador de pH.

Los compuestos de carbono (carbohidratos o polialcoholes) deben ser incorporados, algunos requieren de ser degradados en monómeros y transportados a la célula para posteriormente en condiciones anaerobias ser metabolizados por la vía fermentativa. La fermentación (degradación) de un compuesto orgánico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la formación de gas capturado en la campana de fermentación.

Negativo/Positivo(A)/Positivo(AG)

Oxidación/Fermentación

Las bacterias utilizan hidratos de carbono por uno de dos procesos metabólicos, fermentativo u oxidativo. La principal diferencia es la necesidad de oxígeno atmosférico y una fosforilación

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