Tabla de Pruebas bioquimicas
Enviado por jennifermontserr • 11 de Mayo de 2019 • Monografías • 2.926 Palabras (12 Páginas) • 266 Visitas
NOMBRE | COMPOSICIÓN | FUNDAMENTO | UTILIDAD | FORMA DE INOCULAR | INCUBACIÓN | REACTIVOS ADICIONADOS | INTERPRETACIÓN | REPORTE DE PRUEBA | REPRESENTACION |
LÍQUIDOS | |||||||||
ROJO DE FENOL + (fermentación de carbohidratos) | Peptona………….……….10g Extracto de carne …...1g Cloruro de sodio ……...5g Agua desionizada ….…1L Rojo de fenol……….0.018g Sin inocular naranja pH 7.4 Ácido: amarillo pH 6.8 Alcalino : rosa-rojo pH 8.4 | Se basa esencialmente en si los microrganismos llevan a cabo el proceso de fermentación. La fermentación es un proceso metabólico de redox en medio anaerobio y un sustrato orgánico sirve como aceptor final de hidrógeno (electrones).
Sacarosa--🡪glucosa +fructosa Maltosa----🡪2 Glucosa Lactosa----🡪glucosa+ galactosa | Formas de fermentación características para especies bacterianas específicas Diferenciando entre géneros y especies. Gram (-) y (+) .Enterobacteriace | Con hisopo u asa bacteriológica por difusión por agitación Inóculo denso | En aerobiosis o anaerobiosis según el microorganismo que se sospecha. A 35o C por 18 a 24 h Puede ser hasta por 30 días para considerarse negativo | Carbohidrato al 1% | POSITIVO: color amarillo, producción de gas variable (Observación de burbujas en la campana Durham.)ÁCIDO NEGATIVO: color rosa- rojo. ALCALINO RETARDADA: color naranja (volver a inocular) | POSITIVO A/F NEGATIVO | [pic 1] |
GLUCOSA | |||||||||
LACTOSA | |||||||||
SACAROSA | |||||||||
MANITOL | |||||||||
SORBITOL | |||||||||
CALDO NITRATO (Reducción de nitratos a nitritos) | Extracto de carne…….3g Peptona…………………..5g Nitrato de potasio…….1g Agua destilada………….1L 1ml x tubo amarillo transparente pH 7 | En esta prueba se detecta una respiración anaerobia donde el oxígeno se obtiene del nitrato (oxidación). Los nitratos se reducen a nitritos y algunas bacterias reducen los nitritos a productos gaseosos (N2 y N2O). Las enzimas responsables de ambas reducciones se denominan nitrato y nitrito reductasa, respectivamente. NO3 + 2e- + 2H+ 🡪 NO2 + H2O 2NO3 + 10e- + 12H+ 🡪N2 + 6 H2O | Diferenciación de especies (Haemophilius vaginalis y Neisseria mucosa) Identificación de Enterobacteriaceae, por lo general + | Inóculo denso. Inoculación por difusión. | 35o C de 12 a 24 h Rara vez se prolonga hasta 5 días; 24-48 h | Reactivo A: intensifica el color, 1ml α-naftilamina 0.5% Dimetil-α-naftilamina 0.6% Sales de diazonio Reactivo B: da color, 1ml Ácido sulfanílico 0.8% | POSITIVO: presencia d color rosa-rojo en 30 seg. NEGATIVO: amarillo; fase2 FASE 2: agregar zinc (20mg) (reductor) Confirmación de negativo: desarrollo de color rosa-rojo. Positivo: ausencia de desarrollo de color .Liberación de gases. | POSITIVO + NEGATIVO - | [pic 2] |
[pic 3] | |||||||||
CALDO RM-VP (ROJO DE METILO/ VOGUES PROSKAUER) | Polipeptona………………7g Dextrosa (glucosa)….…5g Fosfato de potasio…….5g Agua destilada………….1L pH 6.9 | La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). | Identifica microorganismos que producen grandes cantidades de ácidos (láctico, succínico, acético fórmico) a partir de la glucosa por vía de la fermentación acido mixta. | Inoculación por difusión Inóculo liviano | 35oC durante 48-72 h mínimo (se recomienda incubar a 30° C por 3-5 días ) | Después de 10 min de reposo. POSITVO: color rojo- rosado en la superficie del medio NEGATIVO: color amarillo o cobrizo en la superficie del medio | POSITIVO + NEGATIVO - | [pic 4] | |
Prueba de VOGUES PROSKAUER (IMViC) (prueba rojo de metilo) | Se utiliza para identificar bacterias que al degradar la glucosa por la vía de la fermentación acido mixta , producen acetoína , la cual es un producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa | Inocular por difusión el caldo RM-VP. Inoculo liviano | 35°C durante 24-48 h | A: α- naftol al 5%, 0.6ml intensificador de color B: hidróxido de potasio o de sodio al 40%, 0.2ml, agente oxidante Después de la incubación agregar 0.6mL de A Y 0.2 mL Agitar con suavidad y exponer al oxígeno atmosférico a fin de oxidar la acetoína |
SEMISÓLIDOS | |||||||||
GELATINA NUTRITIVA (licuefacción de la gelatina) | Extracto de carne…..….3g Peptona…………..………..5g Gelatina……………..….120g Agua destilada…….…….1L pH 6.8 a 7 amarillo pálido | Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteólico que licuan la gelatina. Las proteínas que se producen naturalmente son muy grandes para entrar en la célula bacteriana; por lo tanto para utilizarlas deben ser catabolizadas en componentes más pequeños. | Se utiliza como apoyo taxonómico para la identificación y clasificación de bacterias fermentadoras y no fermentadoras, principalmente para identificar cultivos puros. Ayuda a la diferenciación entre géneros (S aureus + del S epidermidis + lento; y Listeria monocytogenes – de algunas Corynebacterium) Ayuda a la identificación de Serratia liquefaciens +, Serratia marcescens +, P aeruginosa + rápida, Flavobacterium + | Punción en vertical hasta una profundidad de 1.5 a 2.5 cm, inóculo denso Mantener en refrigeración hasta inocular | 35oC de 24-48 h Hasta 14 días | Al termino colocar el tubo en refrigeración por 2 horas para determinar si se ha producido la licuefacción | POSITIVO: Medio licuado (líquido) NEGATIVO: Medio sólido | POSITIVO + NEGATIVO - | [pic 5][pic 6] |
O/F GLUCOSA (prueba de oxidación-fermentación) | Peptona (triptona)…….2g Cloruro de sodio………..5g Fosfato de potasio….0.3g Azul de bromotimol…0.03-0.08g Agar………………………3-5g Agua destilada………….1L | Determinar el metabolismo oxidativo o fermentativo de un carbohidrato solo en condiciones aerobia (oxidación) mientras que otras producen acido tanto de modo anaerobio como anaerobio (Fermentación). | Medio de cultivo, que al ser suplementado con hidratos de carbono, se usa para determinar el metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram negativas. Esta prueba es útil para diferenciar especies bacterianas. También, permite determinar movilidad y producción de gas. | Picar dos tubos hasta 0.6 mm del fondo con inóculo poco denso y cubrir los tubos (sellado y cerrado) con 1ml de vaselina, aceite mineral | 35oC 48 h o más, puede necesitar de 3 a 4 días o hasta 14 | Carbohidratos en solución acuosa al 10% Lactosa, sacarosa, manitol, sorbitol, etc. | Si el tubo de oxidación "O" se torna amarillo, pero el de fermentación "F" queda verde la bacteria es una oxidadora, no fermenta ese carbohidrato Si el tubo "O" permanece verde y el tubo "F" se torna amarillo: la bacteria fermenta pero no oxida, es una fermentadora, una anaerobia estricta, no oxida. Si ambos tubos quedan amarillos: bacteria anaerobia facultativa, oxida y fermenta el carbohidrato Si ambos tubos quedan verdes: bacteria inerte, no utiliza el carbohidrato por ninguna vía metabólica | Se debe informar: producción de ácido (A), ácido con gas (AG), alcalino (K) o sin cambio (-). También, puede informarse si el organismo es móvil, cuando crece lejos de la línea de inoculación. | [pic 7] |
MIO (movilidad, indol, ornitina) | Dextrosa……………………..1g Extracto de levadura…..3g Peptona…………………….10g Tripteína…………………..10g Clorhidrato de L-ornitidina……………….…..5g Purpura de bromocresol……….…0.02g Agar……………………………2g Agua destilada……………1L | Medio de cultivo semisólido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de levadura, peptona y tripteína. Además, la tripteína aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realización de la prueba del indol, el trip. Es un a.a que peude ser oxidado por algunas bacterias para formar tres metabolitos indolicos (indol, escatol y ácido indol acético). La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina decarboxilasa, el púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo. Por su composición, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa e indol. | Permite determinar si un microrganismo es móvil (presencia de flagelos )o inmóvil (carentes de flagelos) | Punción al centro del medio con aguja de inoculación hasta una profundidad de 1.2 cm | 35o C de 24 a 48 h, si el resultado es negativo incubar a 21-25o C por 5 días Añadir reactivo posterior a la incubación | Reactivo Kovacs: 150ml de alcohol amílico o butílico + 10g de ρ- dimetilamino-benzaldehído + 50ml de HCL concentrado Agregar 5 gotas del reactivo de Kovacs y agitar suavemente | Movilidad: (+) Presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra. (-) crecimiento solamente en la línea de siembra. | ornitina (+) o (-) Indol (+) o( -) Movilidad(+) o (-) | [pic 8] |
Permite determinar la capacidad del microorganismo para formar indol a partir de la degradación del Triptófano(a.a) | Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. (+): color rojo al agregar el reactivo revelador. (-): el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento. | ||||||||
Determina si un microorganismo es capaz de descarboxilar la L-ornitinina a putrescina. | Ornitina decarboxilasa: (+): Color púrpura. (-): color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio. | ||||||||
SIM (SULFURO, INDOL MOVILIDAD) Producción d acido sulfhídrico) | Tripteína…………………..20g Peptona………………..…6.1g Sulfato de hierro y amonio…………………….0.2g Tiosulfato de sodio….0.2g Agar ………………………..3.5g Agua destilada……………1L | Determinar si un organismo es móvil, se es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aa que contienen azufre y su capacidad de desdoblar el indol (indol, escatol e indolacético) de la molécula triptófano. | Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. | Punción al centro del medio hasta una profundidad de 1.2 cm | 35-37o C de 24 a 48 h. Prueba de indol debe ser anaerobia | Reactivo Kovacs: 150ml de alcohol amílico o butílico + 10g de ρ- dimetilamino-benzaldehído + 50ml de HCL concentrado Agregar 5 gotas del reactivo de Kovacs y agitar suavemente | Movilidad: (+) Presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra. (-) crecimiento solamente en la línea de siembra. | Sulfuro (+) o (-) Indol (+) o (-) Movilidad (+) o (-) | [pic 9] |
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. | [pic 10] | ||||||||
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich. Cepas indol negativas: sin cambio de color. | [pic 11] | ||||||||
SÓLIDOS | |||||||||
TSI TRIPLE AZUCAR HIERRO (Fermentación d carbohidratos con producción de gas o sin ella) | Extracto de carne…….3g Puiripeptona……………20g Cloruro de sodio……….5g Lactosa……………………10g Sacarosa………………….10g Glucosa…………………….1g Sulfato de hierro amonio…………………..0.2g Tiosulfato de sodio…0.2g Rojo de fenol………0.025g Agua destilada……………1L Color café | Determinar la capacidad de un organismo de atacar un carbohidrato específico incorporado en un medio de crecimiento básico, con producción o no de gases, junto con la determinación posible de ácido sulfhídrico.
| Medio universalmente empleado para la diferenciación de Enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. | Por punción y estría Inoculo liviano | 35o C de 18 a 24 h | 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. | K/A (glucosa +) A/A (glucosa y lactosa +) K/K (no fermentación) Pico de flauta/ profundidad K: alcalino A: acido Producción de gas (+) o (-) | [pic 12] | |
LIA LISINA HIERRO AGAR (prueba de descarboxilacion de la lisina) | Peptona………………..…..5g Extracto de levadura...3g L-lisina……………………..10g Citrato de amonio y hierro……………………..0.5g Tiosulfato de sodio…………………….0.04g Glucosa……………………..1g Agar…………………………15g Purpura de bromocresol………...0.02g Agua destilada………….1L Color púrpura | Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aa para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. La descomposición de aa se produce anaeróbicamente, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal. La L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acción de lisina-descarboxilasa | Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. | Por punción y estría inóculo liviano | 35-37o C de 18 a 24 h hasta 4 días | Decarboxilación de la lisina: -Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta. -Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo. | A: ácido K: alcalino N: neutro R: rojo (desimanación oxidativa) k/k: azul de prusia/ azul de Prusia Desaminación ox/ descarboxilación K/A azul de Prusia/ lila no desaminación | [pic 13] | |
Desaminación de la lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp. Producción de ácido sulfhídrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo | |||||||||
CITRATO DE SIMMONS (aprovechamiento de citratos como única fuente de energía ) | Sulfato de magnesio..0.2g Monofosfato de amonio o fosfato de amonio dihidrogenado…………….1g Fosfato dipotásico……...1g Citrato de sodio………….2g Cloruro de sodio……..….5g Agar…………………….15-20g Azul de bromotimol (1.5%sln alcohólica)……………..0.08g Agua destilada…………….1L Color verde pH 6.9 | Determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo, provocando alcalinidad y fosfato de amonio como fuente de nitrógeno. El metabolismo de l citrato comprende una condensación de acetilo con la CoA (citritasa) y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. pH alcalino: + acetato y formiato pH ácido: acetoína y lactato principales productos | Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía | Inóculo liviano Únicamente en cola de pescado sobre el pico de flauta | 35o C de 24 a 48 h, a veces es necesario prolongar hasta por 4 días | Limitaciones -Si se usa un inóculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo-amarronado. Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualización azul de un resultado positivo. -Inóculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos. | POSITIVA: Crecimiento con color azul de prusia intenso en pico NEGATIVA: No crecimiento, ni cambio de color (verde) | POSITIVO + NEGATIVO - | [pic 14] |
UREA DE CHRISTENSEN (prueba de la ureasa) | Peptona……………………..1g Cloruro de sodio…………5g Fosfato momopotásico.2g Glucosa……………………….1g Urea………………………….20g Rojo de fenol……….0.012g Agar …………………..15-20g Agua destilada……………1L pH 6.8 color amarillo | Determinar la capacidad e un organismo de desdoblar la urea, formando 2 moléculas de amoniaco por acción de la enzima ureasa. La ureasa es una enzima constitutiva ya que es sintetizada con o sin su sustrato presente y actúa sobre los enlaces C-N del compuesto, con excepción de enlaces peptídicos | Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias Para la diferenciación de bacterias en base a su capacidad de hidrolizar la urea, principalmente de los géneros Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter que lo realizan lentamente y del género Proteus. | Inóculo denso Estría en la superficie del pico de flauta(no puncionar el fondo) | 35 °C durante 24 h y todos los días sucesivos durante 6 días | POSITIVA: color rojo- rosado intenso (violáceo) NEGATIVA: no hay cambio de color (amarillo pálido) | POSITIVO + NEGATIVO - | [pic 15] | |
AGAR FENILALANINA | DL-fenilalanina………..…2g Extracto de levadura….3g Cloruro de sodio…………5g Fosfato de sodio…………1g Agar………………………….12g Agua destilada……………1L Color amarillo claro | Determinar la capacidad de un organismo de desaminar la fenilalanina de ácido fenil-pirúvico por su actividad enzimática, con la consiguiente acidez resultante La fenilalanina sufre la desaminación oxidativa catalizada por un aminoácido oxidasa, una flavoproteína para producir el ácido cetónico, ácido fenilpirúvico, q luego es reducido a ácido feniláctico. | Medio de cultivo utilizado para diferenciar Morganella morganii biogrupo 1 y 2, Proteus spp. y Providencia spp., de la mayoría de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae, en base a la presencia de la enzima fenilalanina deaminasa. | Inoculo denso Inocular por punción y estriado | 35°C 18-24 h *Lectura inmediata por que el color es inestable | Solución acuosa de cloruro férrico al 10%. Acidificado: FeCl3 12 g + HCL 2.5 ml y agua 100ml Agregar 4 o 5 gotas de FeCL3 directamente al tubo incubado, hacer rotar el tubo para q el crecimiento se separe y en 1-5 min produce rx + de color verde en el pico de flauta* | Positivo: desarrollo de color verde pálido a intenso en el pico de flauta y en el líquido de condensación. Negativo: sin cambios de color. El medio permanece amarillo debido al color del reactivo cloruro férrico. | POSITIVO + NEGATIVO - | [pic 16] |
AGAR ALMIDON (hidrólisis del almidón) | Peptona……………………5g Extracto de carne…….3g Cloruro de sodio………5g Agar……………………….20g Agua desionizada……….1L Almidón 0.2%............20g pH 7.2 | Determinar la capacidad e un organismo de hidrolizar el almidón por medios enzimáticos y probar la desaparición de este por uso de un reactivo con yodo. La primear dextrina formada es la eritrodextrina que da un color con yodo q progresa de azul al violeta al rojo castaño, a medida q la hidrólisis progresa el color del yodo no se produce por la formación de acrodextrinas que son incoloras Almidón 🡪 α- amilasa (azul) + amilopectina (rojo castaño) Amilopectina 🡪 dextrinas + acrodextrinas 🡪 α-maltosa 🡪 glucosa | es utilizado en la selección de microorganismos productores de amilasas y también en los cultivos de hongos. | Inoculo denso Siembra por estría en cuatro cuadrantes | 35°C 24-48 h | Yodo de Gram: I2 1g + KI 2g + 300ml agua Yodo de Lugol: I2 5g + KI 10g + 100ml agua Bañar con el reactivo e interpretar de inmediato | POSITIVO: medio de color púrpura-azul con un área incolora alrededor del crecimiento PARCIAL: violeta a rojo castaño NEGATIVO: Color púrpura-azul en el crecimiento | POSITIVO + NEGATIVO - | [pic 17] |
AGAR LECHE TORNASOL | Leche desnatada……100g Tornasol en polvo…5g Agua desionizada………1L *Peptona………………..10g pH 6.8 ± 0.2 color purpura | Diferenciar los organismos sobre la base de sus múltiples reacciones en un medio con leche. La leche contiene 3 proteínas principales: caseína, lactoalbúmina y lactoglobulina Por tanto en m.o. puede exhibir una o varias propiedades metabólicas: fermentación de la lactosa (reducción) formando ácido láctico u ácido butírico, no fermentadoras producen amoníaco con pH alcalino; reducción de tornasol por reducción de niveles de oxígeno, formación de coágulo ácido y firme por pp de caseína por ácidos orgánicos, formación de cuajo por conversión de caseína en para caseína por rennina, pepsina; peptonización por pp de caseína mediante la formación de ácido y formación de gases (CO2 y H2) que pueden romper el coágulo ácido. | Diferenciar especies de Clostridium (cuadro) Enterococcus-color blanco Stretococcus bovis de S equinus Propionibacterium acnés + y P avidum+ de P granulosum – Leuconostoc lactis y L pseudomesenteroides (ácido coágulo) de L mesenteroides – y L citreum | Estría o difusión | 35o C 18-24 h o hasta 14 días Seudomónadas fluorescentes 25o C de 4 a 7 días | ROJO-ROSADO (A): ácido, lactosa y glucosa fermentadas AZUL PURPÚREO (NC/-): Sin fermentación AZUL(ALC/K): Alcalina, sin fermentación de lactosa, acción sobre lactoalbúmina con NH3 BLANCO (reducción): reducción del tornasol, elimina el oxígeno formando compuestos leucotornasolados incoloros COÁGULO (C):pp por ácido de lactosa, no retrae y soluble en álcalis Caseína en paracaseína por rennina, retrae, suero PEPTONIZACIÓN (D, digestión): proteína de la leche digerida, medio claro, disolución del cuajo por enzimas proteolíticas GAS (G): burbujas en el medio Fermentación tormentosa (S): coágulo ácido se rompe por gas | A NC/- K Red C G S | [pic 18] |
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