Practica 10 Pruebas bioquímicas
Enviado por Aleh Azul • 14 de Agosto de 2017 • Trabajos • 1.518 Palabras (7 Páginas) • 437 Visitas
UNIVERSIDAD DE CIENCIAS Y ARTES DE CHIAPAS[pic 1]
Instituto de ciencias biológicas.
Microbiología
Profesor:
Javier Gutiérrez Jiménez.
Alumno:
Alejandra del Carmen González Cancino
Practica 10
Pruebas bioquímicas
Segundo Semestre Grupo “B”
Tuxtla Gutiérrez, Chiapas Noviembre 2016.
INTRODUCCIÓN:
Las pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones que determinan la actividad de una vía metabólica de la bacteria a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. Para ello, hay que partir de un cultivo puro obtenido en el aislamiento, subcultivando de una colonia bien aislada. Es aconsejable realizar una comprobación efectuando una siembra en placa en la que crezcan únicamente colonias del mismo tipo.(MacFaddin 2003)
OBJETIVO:
Que el alumno efectúe ensayos enzimáticos sencillos para determinar la presencia o ausencia de una enzima específica; asimismo, que reconozca la utilidad de las pruebas bioquímicas en la identificación microbiana, con base en sus actividades metabólicas sobre algunos azúcares, ácidos orgánicos y algunos aminoácidos.
PROCEDIMIENTO Sesión 1.
1. Sembrar por estría cruzada en agar nutritivo a Staphylococcusaureus, Escherichiacoli, Klebsiellapneumoniaey Pseudomonasaeruginosa. En una placa con agar chocolate o agar sangre, sembrar Streptococcuspyogenes o Enterococcusfaecalis.
Sesión 2. Prueba de catalasa.
1. Bajo técnica aséptica, tomar una asada del crecimiento de S. aureus y extender el material sobre un portaobjetos. Efectuar la misma operación en otro portaobjetos pero con una asada de la cepa de S. pyogenes o E. faecalis.
2. Añadir una gota de peróxido de hidrógeno al 3% y observar.
3. Si aparece una efervescencia, interpretar la prueba de catalasa como positiva. Si no aparece la efervescencia, interpretar la prueba de catalasa como negativa.
4. Depositar las laminillas en un vaso de precipitado con hipoclorito de sodio al 1% y lavar al final de la práctica.
Prueba de oxidasa.
1. Bajo técnica aséptica, tomar con una pinza de disección un disco comercial impregnado con reactivo de Kovacs para oxidasa (diclorhidrato de tetrametil p-fenilendiamina al 1%), y depositarlo sobre un portaobjetos.
2. Tomar una asada del crecimiento de E. coliy extender el material sobre el disco. Hacer la misma operación y con otro disco pero con una asada de P. aeruginosa.
3. Observe el área inoculada en ambos discos durante 10 segundos, y si aparece un cambio de color a púrpura intenso considere la prueba de oxidasa positiva. Si dentro este tiempo no ocurre algún cambio de color, considere la prueba de oxidasa negativa.
4. Tome los discos con la pinza de disección y deposítelos en el vaso con solución de hipoclorito de sodio al 1%.
Pruebas bioquímicas en tubo y miniaturizadas. Sesión 1.
- Preparar tubos con agar hierro de Kliger, medio LIA, medio MIO, agar citrato de Simmons, medio OF (Hugh-Leifson) con dextrosa al 1% y caldo RM-VP.
RESULTADOS:
Medio | Bacteria YES 1 | Escherichia coli | ||
TSI | Sin cambios de color pero contaminación en la superficie | Amarillo con burbujas. | ||
LIA | Purpura(alcalino) consumo la lisina | Este se presento en color amarillo, con un ph acido y consumo de lactosa. | ||
MIO | Es inmóvil (claro) | Consumo de ornitina, presenta turbidez (móvil) | ||
Citrato | Si consume, dado a que se encuentra un poco de contaminación | No consume la bacteria. | ||
Of | Sin reacción no son sacaroliticas | Oxida y fermenta el azúcar. | ||
MR- V | Rojo de metilo | KOH y alfa-naftol | Rojo de metilo | KOH y alfa-naftol |
Coloración roja | Coloración amarillenta |
En esta tabla podemos observar las anotacónes de cada medio respectivo
Citrato: Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Enzimáticas.
Indol: La prueba del Indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos.
Rojo de Metilo: Estudia la fermentación ácido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo.
DISCUSIÓN:
Las pruebas bioquímicas son quienes determinan la actividad metabólica, de una cepa pura así como la identificación y clasificación de bacterias y hongos. Para que una célula viva, crezca y se reproduzca, debe ser capaz de incorporar y transformar (mediante el metabolismo) los compuestos químicos que necesita para obtener energía (catabolismo), así como las moléculas que pasarán a formar parte de su material celular (anabolismo). Todas las reacciones químicas que se llevan acabo son catalizadas por enzimas (catalizadores biológicos de naturaleza proteica y actividad específica), las cuales se clasifican, de acuerdo al lugar del ambiente celular donde actúan, en exoenzimas y endoenzimas. Las pruebas bioquímicas se emplean para identificar de forma clara y precisa, la presencia o ausencia de una enzima, de un grupo de enzimas, o de una vía metabólica completa en uno o más microorganismos.(Albarracin, Trujillo and Borges 1982)
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