SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN
Enviado por grrr07 • 18 de Febrero de 2015 • 955 Palabras (4 Páginas) • 1.602 Visitas
RESULTADOS
Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno
Tubo no. Volumen de elución (mL) A493 A668 Observaciones
1 3 0.008 0.001 Transparente
2 6 0.002 0.030 Azul tenue
3 9 0.039 0.495 Azul
4 12 0.020 0.214 Azul
5 15 0.005 0.092 Azul
6 18 0.003 0.042 Azul
7 21 0.001 0.031 Azul
8 24 0.000 0.020 Azul tenue
9 27 0.001 0.014 Transparente
10 30 0.003 0.010 Transparente
11 33 0.002 0.008 Transparente
12 36 0.003 0.007 Transparente
13 39 0.001 0.006 Transparente
14 42 0.003 0.003 Transparente
15 45 0.002 0.002 Amarillo tenue
16 48 0.043 0.002 Amarillo
17 51 0.746 0.007 Amarillo
18 54 0.157 0.008 Amarillo
19 57 0.043 0.011 Transparente
20 60 0.022 0.008 Transparente
21 63 0.021 0.008 Transparente
22 66 0.021 0.008 Transparente
23 69 0.015 0.007 Transparente
24 72 0.016 0.018 Transparente
25 75 0.012 0.008 Transparente
*Los valores de A (493 nm) no son los obtenidos experimentalmente ya que se obtuvieron algunos valores negativos. Se realizó un ajuste matemático adicionando 0.006 a cada dato obtenido por lo tanto la absorbancia más negativa de -0.006 ahora es 0.000
DISCUSIÓN
En ésta práctica se llevó a cabo la separación de una muestra de azul de metileno y fluoresceína. En el perfil de elución se puede observar en el tubo 3 (volumen 9 mL) el primer pico de absorción en el a 668 nm y un pequeño pico en la curva a 493 nm, de acuerdo a la bibliografía el azul de metileno tiene una absorción máxima a 661 nm pero también absorbe un poco a 493 nm por lo que podemos comprobar que se obtuvo primero este componente. Observamos un segundo pico en el tubo 17 (volumen 51 mL) a 493 nm que coincide con la máxima absorción de la fluoresceína. Según la bibliografía la fluoresceína tiene una absorción máxima a 493.4 y 460 nm. Así mismo en los tubos 3 y 17 se observó una coloración azul y amarilla respectivamente.
En el perfil de elución las dos curvas no se intersectan por lo que podemos decir que la separación se realizó adecuadamente.
El sistema cromatográfico que se utilizó para esta separación consta de un soporte formado por la columna cromatográfica, una llave reguladora, una llave de cerrar, y un disco de lana de vidrio. Dos fases móviles: agua (etapa 1) y regulador de fosfatos (etapa 2), una fase estacionaria de Alúmina ácida (óxido de aluminio) pH 5 y los solutos a separar: azul de metileno y fluoresceína.
Para describir los resultados experimentales es necesario conocer las propiedades de las sustancias que intervienen en el proceso de separación:
La alúmina u óxido de aluminio (reactivo de Brockmann) es un adsorbente ligeramente básico debido a que en el proceso de extracción de la alúmina a partir de la bauxita quedan algunas moléculas de hidróxido de aluminio adheridas a la alúmina, dándole a ésta un carácter básico. Es un compuesto polar por lo que retiene mejor componentes polares.
El azul de metileno es un compuesto solido con forma de cristales o polvo cristalino y de color verde oscuro, con brillo bronceado. Es inodoro y estable al aire. Es fácilmente soluble en el agua y en cloroformo, y moderadamente soluble en alcohol. Su solubilidad es de 40 g/l en agua
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