Separación de una mezcla de azul de metileno
Enviado por VNESSY • 1 de Marzo de 2016 • Prácticas o problemas • 1.344 Palabras (6 Páginas) • 328 Visitas
FUNDAMENTO
La cromatografía por adsorción es una técnica de separación e identificación selectiva de sustancias químicas, su principio es la diferente retención que experimentan los componentes de una mezcla, al ser más o menos adsorbidos por los elementos de una fase estacionaria (adsorbente de carácter polar) situada en una columna y cuando son arrastrados por un fluido (Eluyente) apolar. Se utiliza con fines analíticos (identificación de sustancias) y preparativos (de aislamiento).
OBJETIVOS
-Entender el funcionamiento de la cromatografía por adsorción
-Realizar el perfil de elución para comprobar que esta técnica fue útil y satisfactoria en la separación de Azul de Metileno y Fluoresceína.
RESULTADOS:
Tabla 1. Valores de Absorbancia obtenidos para la separación de Fluoresceína y Azul de Metileno.
Volumen de elución (ml) | Fluoresceína A493 | Azul de Metileno A668 |
3 | 0 | 0.003 |
6 | 0 | 0.009 |
9 | 0 | 1.740 |
12 | 0 | 0.852 |
15 | 0 | 0.445 |
18 | 0 | 0.083 |
21 | 0 | 0.038 |
24 | 0 | 0.029 |
27 | 0 | 0.048 |
30 | 0 | 0.011 |
33 | 0 | 0.010 |
36 | 0 | 0.009 |
39 | 0 | 0.014 |
42 | 0 | 0.011 |
45 | 0 | 0.004 |
48 | 0 | 0.012 |
51 | 0 | 0.005 |
54 | 0 | 0.004 |
57 | 0 | 0.082 |
60 | 0 | 0.005 |
63 | 0 | 0.008 |
66 | 0 | 0.007 |
69 | 0 | 0.013 |
72 | 1.556 | 0.008 |
75 | 1.531 | 0.006 |
78 | 0.656 | 0.019 |
81 | 0.240 | 0.168 |
84 | 0.166 | 0.049 |
87 | 0.051 | 0.007 |
90 | 0.038 | 0.0041 |
93 | 0.027 | 0.005 |
96 | 0.012 | 0.022 |
99 | 0.012 | 0.013 |
[pic 1]
Grafica 1. Perfil de Elución según datos obtenidos.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
Procedimos a la separación de una mezcla compuesta de dos colorantes, azul de metileno y fluoresceína por lo que empleamos alúmina como adsorbente.
En base al perfil de elución, se observa en la gráfica que, los puntos máximos de cada curva no se traslapan, lo que nos indica que la separación de ambos colorantes fue realizada de manera satisfactoria.
En las lecturas realizadas en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 668 nm con el Azul de Metileno, se aprecia un máximo a los 9 ml y a partir del volumen de 21 ml y hasta el final de la determinación se observan algunos picos en la absorbancia, pero que no representan un valor significativo. Recordemos que en este tipo de cromatografía de adsorción las fases móviles más fuertes (mayor poder de elución) son las más polares, mientras que los disolventes apolares o poco polares son débiles (poco poder de elución). Así pues empleando el agua destilada como fase móvil el azul de metileno es el único analito eluido mientras que la fluoresceína es fuertemente retenida por la fase estacionaria.
En la segunda lectura a 493 nm para la fluoresceína, se aprecia que en los primeros volúmenes obtenidos no existe una absorbancia como tal y comienza a presentar un incremento real a los 72 ml y al pasar de los 87 ml fue disminuyendo; para la elución se utilizó el regulador de fosfatos (K2HPO4) como fase móvil, ya que el mismo modifica las cargas de las alúmina ácida llevando a esta a la neutralidad provocando que las interacciones entre la fase estacionaria y la fluoresceína disminuyan considerablemente lo que permite el paso del colorante través de la columna. Esta longitud de onda fue utilizada, debido a que la fluoresceína presenta su máxima absorbancia a 493 nm.
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