Su objetivo es obtener un gran número de copias de DNA partiendo de un mínimo.
Enviado por Jesús Antonio • 9 de Abril de 2018 • Resúmenes • 559 Palabras (3 Páginas) • 103 Visitas
Técnica | Características | Ventajas | Desventajas | Aplicaciones |
PCR Punto Final | Su objetivo es obtener un gran número de copias de DNA partiendo de un mínimo. Necesitamos:
| Es más económica en comparación a otras técnicas de PCR. | La amplificación del gen de interés puede ser poco especifica | - Detección de mutaciones - Identificación de cadáveres - Pruebas de paternidad - Investigación científica - Diagnóstico de enfermedades genéticas e infecciosas |
PCR Anidada (nested) | Su objetivo es incrementar la sensibilidad de detección y especificidad, y se llevan a cabo dos rondas de amplificación. Se utilizan dos pares de primers (externos e internos) | Más especifica que PCR punto final | Aumenta la posibilidad de que la reacción se contamine. No es posible cuantificar la muestra | - Diagnóstico de enfermedades genéticas o infecciosas - Detección de mutaciones con mayor especificidad - Investigación cientifica |
PCR Múltiple | Se utiliza cuando se desea amplificar más de dos fragmentos en la misma muestra - Se utilizan más de dos pares de primers (cada par, para cada fragmento en específico que se desea amplificar) | - Mayor eficiencia - Indicación de la calidad y cantidad de la plantilla - No compromete la utilidad del experimento - Ahorro de tiempo y esfuerzo | - Difícil optimización. - Aumenta el costo - Hibridación cruzada - Unión de primers a fragmentos incorrectos | - Identificación de mutaciones - Identificación de patógenos - Detección de RNA - Estudios Forenses |
PCR Hot Start | Se utiliza cuando se necesita que sólo se amplifique el fragmento de interés (amplificación específica). La reacción comienza cuando la temperatura es de 95°C , por el uso de anticuerpos, antipolimerasa, separación de los reactivos con cera o agregando la polimerasa después del periodo de calentamieno. | - Evita que los cebadores se unan a secuencias de plantillas no correspondientes. - No se unen los primers entre si - Aumenta la sensibilidad y rendimiento de la amplificación del fragmento de interés. | - El costo aumenta en comparación con el uso de PCR punto final. - Se puede contaminar la reacción al agregar los primers, después del periodo de calentamiento. | - Identificación de patógenos - Detección de mutaciones - Identificación de cadáveres - Investigación científica |
PCR Touchdown | Esta técnica se utiliza cuando no es bien conocida la secuencia o el primer. Inicia 5 o 10ºC por arriba de la temperatura de fusión y termina con 2 o 5ºC por debajo de la temperatura de fusiòn | Útil en plantillas difíciles de amplificar. -Útil cuando la complementariedad entre los cebadores es incierto. - Aumenta la sensibilidad, especificidad y rendimiento. | - No se puede evaluar de manera cuantitativa la concentración del objetivo | - Identificación de patógenos |
PCR Asìmetrica | Se utiliza para amplificar en mayor proporción una de las cadenas de DNA molde, por lo que se tiene que agregar en mayor proporción uno de los primers (Fw o Rv). La cadena resultante se puede utilizar para ser secuenciada o como sondas para hibridaciones. | - Útil para la secuenciación de cadenas sencillas | -No podemos cuantificar la muestra |
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PCR In Situ | Se amplifican fragmentos de DNA en tejidos o células, Se realizan en porta objetos. | -Útil cuando no contamos con DNA, pero si de células o tejidos. -Pueden detectarse cantidades pequeñas del genoma -Alta sensibilidad | -Se requieren de equipos costosos -Se debe destruir las células o el tejido a evaluarse | -Muy útil para la detección de agentes infecciosos en diferentes tejidos o células. |
PCR de Colonia | Se realiza la amplificación de algún fragmento de interes a partir de una colonia, no es necesaria la extracción del DNA, se hace uso de un vector recombinante |
| -No se puede cuantificar el material obtenido. | -Útil para la identificación de clonas recombinantes |
PCR Long | ||||
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