Tecnicas De Tincion Histologica

Introducción

El estudiar una célula o una asociación de ellas, para conocer su estructura morfológica microscópica y deducir, sus funciones, no bastaría con examinarlas a través de los instrumentos que amplían imágenes de los objetos observados (microscopios fotónicos y electrónicos), pues al intentar hacerlo se presentan serias dificultades en la manipulación de los especímenes y el inicio de los procesos propios de desarreglo molecular en este caso la autolisis, que es la acción de las enzimas intracelulares destruyendo a la célula; o la presencia a de putrefacción que es una acción bacteriana en la descomposición de la célula o tejido; ambos suelen presentarse después que las células y los tejidos abandonan su hábitat natural. Por lo tanto, es necesario utilizar una serie de procedimientos y artificios que nos permitan describir, comprender y analizar la estructura microscópica de las células, tejidos y órganos.

Se denomina TÉCNICA HISTOLOGICA al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de los microscopios fotónicos y electrónicos.

Dentro de la técnica histológica se utilizan dos procedimientos diferentes; uno de ellos permite la observación de células vitales que se hacen crecer fuera del organismo o bien células sanguíneas, células descamadas o disociadas, epidermis, granos de polen, entre otras estas técnicas se llaman técnicas supravitales; las otras técnicas son llamadas postvitales pues tienen por finalidad preparar células, tejidos y órganos procedentes de seres en los que los procesos vitales se han detenido y es necesario conservar la estructura que tenían en vida.

TÉCNICA HISTOLOGÍA DE RUTINA PARA CÉLULAS Y TEJIDOS

Para poder observar la muestra a través del microscopio óptico está debe de ser "preparada" mediante un proceso que veremos a continuación.

Primeramente se requiere tomar la muestra; Los métodos más utilizados son: Biopsias, Necropsias, Improntas, Frotis de células superficiales, Frotis de células sanguíneas, Animales de experimentación, Aplastados celulares.

Enseguida la fijación debe realizarse lo más rápido posible luego de tomada la muestra, para evitar los procesos de autolisis. Además se debe escoger el método más adecuado al objetivo del estudio a realizar. Se pueden clasificar en los siguientes métodos:

 Por inmersión: pequeños trozos del tejido son sumergidos en el líquido fijador.

 Por perfusión: el líquido fijador se aplica por inyección vascular.

 Por vapores: consiste en utilizar líquidos fijadores que emitan vapores, se debe realizar bajo campana extractora de gases.

Luego de que la muestra ha sido fijada se debe eliminar el fijador y deshidratar. Para esto se utiliza una serie gradual de soluciones acuosas con una concentración de menor a mayor del agente deshidratante, como por ejemplo alcohol etílico. La deshidratación gradual se hace para evitar la deformación de la morfología del tejido, debido a la rápida salida del agua.

Posterior a la deshidratación el tejido se debe sumergir en un líquido que sea miscible tanto en el medio de inclusión como en el medio de deshidratación. El líquido comúnmente utilizado es el xilol. Esta etapa se llama aclaramiento debido a que el tejido se vuelve transparente.

Para poder obtener cortes delgados que puedan ser observados al microscopio óptico, los tejidos deben ser incluidos en una sustancia de consistencia firme, la cual puede ser hidrófila o hidrófoba. Un medio hidrófobo que se puede utilizar es la parafina o el paraplast. Este último es una parafina altamente purificada a la cual se le han agregado cantidades variables de polímeros especiales, lo cual le dará distinta dureza y plasticidad al taco de inclusión.

El taco obtenido en la inclusión se debe cortar en secciones lo suficientemente delgadas que permitan el paso de la luz, para esto se utiliza un aparato llamado micrótomo. Para esto el bloque se debe tallar, para eliminar el exceso de parafina, formando una pirámide truncada. Los cortes que se van obteniendo se deben ir estirando, esto se puede realizar en un baño termoregulado (40-45 ºC).

...