Técnicas De Tinción

TÉCNICAS DE TINCIÓN

Objetivo

El alumno aprenderá y aplicará las técnicas básicas de tinción más frecuentes.

Generalidades

La coloración es el proceso de teñir artificialmente los microorganismos con colorantes o reactivos para facilitar su estudio microscópico forma, agrupación y estructuras)

Un colorante es un compuesto orgánico que consta de anillos bencénicos y grupos cromóforos ( agrupación de átomos que da color a ciertos compuestos) y auxocromos ( sustituyentes como el grupo oxidrilo o el amino que mejoran las características de absorción del cromóforo)

En el laboratorio de microbiología se pueden usar los colorantes de varias formas como:

a) Para teñir bacterias y hacerlas visibles al microscopio

b) Para mostrar estructuras del organismo estudiado.

c) Para la identificación de microorganismos en base a sus características de tinción, por ejemplo, si son o no alcohol-ácido resistentes, si son Gram positivas o Gram negativas.

d) En los medios de cultivo para inhibir el desarrollo de algunas bacterias y así poder estudiar selectivamente a los microorganismos que si crecen.

TINCIÓN DE BACTERIAS

La célula bacteriana intacta se tiñe fácilmente con colorantes básicos como el cristal, azul de metileno y fucsina básica, pero relativamente mal con colorantes ácidos como la eosina.

Un colorante básico es aquel constituido por un agrupamiento de átomos orgánicos con carga positiva que será la parte activa del colorante ya que tendrá afinidad por los ácidos nucleicos. Un colorante ácido es aquel que se encuentra constituido por átomos orgánicos con carga neta negativa por lo cual tiene afinidad por el citoplasma.

TIPOS DE TINCIÓN

1. Tinción simple. Conocida con ese nombre ya que solo nos sirve para hacer más fácilmente visibles a las bacterias sin resaltar ninguna característica en especial. Una tinción simple se lleva a cabo cubriendo con colorante básico un frotis seco y fijado al calor. El frotis se deja reaccionar con las células por un minuto y se lava suavemente con agua. El frotis se puede dejar secar o usar papel secante para que quede listo para observarse.

2. Tinción negativa. Este método de tinción utiliza colorantes neutros o ácidos ya que tienen poca afinidad por la célula bacteriana por lo tanto como no se absorben se colorea el fondo en el que están las bacterias pero la célula queda incolora y transparente, así pues las bacterias aparecen como pequeñas áreas iluminadas en un fondo oscuro. La tinción acídica con nigrosina, o neutral ( con tinta china) son las más usadas.

3. Tinción diferencial. Las bacterias se diferencian unas de otras tanto física como químicamente, por lo cual su reacción ante algunos colorantes también será diferente dando lugar así a grupos tintoreales característicos. Entre estos grupos están los que se originan por la tinción descubierta por Hans Christian Gram, esta tinción divide a las bacterias en Gram positivas o Gram negativas lo cual no solo sirve para diferenciarlas sino aún para elegir la terapia adecuada en algunos casos. Existen otras tinciones diferenciales de utilidad en microbiología clínica como la de Ziehl- Neelsen.

4. Tinción estructural. Existen diferentes tipos de colorantes que de acuerdo a su afinidad se utilizan para teñir y detectar ciertas estructuras de la célula bacteriana como son las esporas, los flagelos y las cápsulas.

TINCIÓN SIMPLE

MATERIAL

2 portaobjetos

Asa bacteriológica

Aceite de inmersión

Microscopio

Mechero

Azul de metileno de Löeffler

Cepa de Escherichia coli

TÉCNICA

1. Preparar un frotis de E. coli de acuerdo a las indicaciones de la figura 1 y fijarlo al calor.

2. Cubrir el frotis con azul de metileno y dejar en reposo por un minuto.

3. Lavar con agua corriente suavemente y dejar secar.

4. Observar con el objetivo de inmersión.

TINCIÓN NEGATIVA

MATERIAL Y EQUIPO

4 portaobjetos

Asa bacteriológica

Aceite de inmersión

Microscopio

Vaso de precipitado

...