TECNICAS DE TINCION

TECNICAS DE TINCIÒN

Tinciones de rutina para bacterias, protozoarios y hongos.

Objetivo: Conocer principios y procedimientos de las tinciones mas utilizadas para la observación de los microorganismos y sus estructuras.

COLORANTES

Las bacterias poseen la propiedad de fijar ciertas sustancias colorantes, permitiendo observar algunas de las estructuras bacterias que no se observan en el frasco, por ejemplo; capsulas, esporas, flagelos, membranas, etc. Todo procedimiento de tinción parte de un frotis. Hay algunos tipos de colorantes químicos:

• Colorantes Ácidos; Tienen carga iónica negativa (Carboxilos o hidroxilos fenolicos), no tiñen a la celular bacteriana, son usados para impartir el fondo de contraste al frotis, por ejemplo: la eosina, Rosa de bengala fucsina acida.

• Colorantes básicos; Tienen ion de carga positiva y tiñen las células bacterianas uniformemente, por ejemplo: violeta de genciana, azul de metileno, safranina, verde malaquita, fucsina básica.

• Colorantes neutros; Son sales complejas que poseen ambas cargas iónicas como el eosinato de azul de metileno.

CLASIFICACION DE LOS METODOS DE TINCIÒN

• Métodos de tinción simple: Son aquellos en los que se utiliza un solo colorante; Violeta de genciana, el azul de metileno, el de fucsiana fenicada básica, y el azul de metileno alcalino de Loeeffler.

• Métodos de tinción compuesta: Son aquellos en los que se utilizan más de un colorante; Tinción de Gram, el método de Preston-morrel, el método de Ziehl Neelsen, el método de Kinyoun, método de Albert.

• Métodos de tinciones especiales: Son aquellos donde se utilizan colorantes o reactivos para estudiar ciertas estructuras específicas de las bacterias.

A) Tincion de Gram.

Es aplicable para bacterias y levaduras, divide a las bacterias en dos grupos de acuerdo a los componentes predominantes de su pared celular. Genero Gram positivas (Staphylocoocus, Streotococcus, Listeria, Bacillus, Clostridium) y Genero Gram negativos (Escherichia, Pseudomonas, Salmonella, Brucella, Bordetella).

Prueba de KOH al 3% para comprobar la tinción de Gram.

Procedimiento.

1. Colocar sobre la lámina una gota de KOH al 3% y remover con el Asa durante 2 o 3 minutos.

2. Si al separar el Asa de la mezcla se forma una hebra viscosa, indica que se trata de baterías Gram Negativas.

3. Si la hebra no se forma se trata de bacterias Gram positivas.

B) Tinción negativa de tinta china o maneral.

Las capsulas bacterianas y nicotinas no pueden observarse porque son incapaces de retener el colorante y porque con incapaces de retener el colorante y por que los procesos de fijación al calor y lavado los disuelven. Por lo tanto hay que aplicarle carbón en suspensión (tinta china) apreciándose un efecto como de halo alrededor del organismo el cual construye la capsula.

Procedimiento.

1. Coloque una gota de tinta china en un portaobjetos limpio.

2. Tome con un asa microbiológica una muestra de cultivo, colóquelo sobre la gota de tinta china y mezcle con esta.

3. Coloque un cubreobjetos cuidando que no se formen burbujas.

4. Observe al microscopio para identificar

...