Transformación De Escherichia Coli Con Un Vector Recombinante

Transformación de Escherichia coli con un vector recombinante

que posee el gen badh de P. aeruginosa

Procedimiento:

1-Mezcla del vector 2-Aplicación del 3-Recuperacion

Con células competentes choque térmico de la células.

- -70 C en 10 min. –Transfiera a tubo Eppendort 1.5, - agregue 500mL

+ 5 ml de vector pCALn calentar 1min a 42 de LB atemplado a a 37 C incube c células por

1h, agitación a

200 rpm

4-Selección de células transformadas

Transfiera 150mL, a placas LB-Amp,

Extienda el liquedo sobre una placas

con ayuda de una varilla de vidrio.

SIGUIENTE DÍA……

_ Las células transformadas serán utilizadas en la próxima actividad experimental. En el

caso de que no utilice las bacterias inmediatamente, puede almacenar las placas a 4 °C

durante unos días.

RECOMENDACIONES:

-Los pasos en los que se abren los tubos de las células competentes deberán de realizarse

dentro de una campana de flujo laminar o cerca de un mechero, pero sin calentar el tubo

que las contiene.

-*Para realizar esta actividad deberá lavar sus manos previamente y frotarlas con etanol

LEJOS DEL MECHERO.

*Deberá de mantener siempre los tubos de las células competentes en el hielo y no

agitarlos ni tocar su parte inferior con las manos

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