Técnicas de hematología.

Técnica

Fundamento

Muestra

GLUCOSA

La glucosa se determina después de la oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona bajo catálisis de la peroxidasa con fenol y 4-aminofenazona produciendo un complejo rojo violeta usando la quinoneimina como indicador.

Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar. El suero o plasma deben separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la glucolisis. La adición de fluoruro sódico a la muestra de sangre previene la glucolisis. La glucosa en suero o plasma es estable 5 días a 2-8ºC. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.

COLESTEROL

El colesterol se determina tras una rólisis enzimática y una oxidación. El indicador quinoneimina se forma a partir de peróxido de hidrógeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.

Suero: Puede ser utilizado.  Plasma: Tratado con EDTA (1 mg/ml) o heparina (up to 75 U/ml) No utilizar citrato, oxalato o fluor.  Las muestras de Plasma y Suero pueden almacenarse durante 4 días +4°C.

TRIGLICERIDOS

Los trigliceridos se determinan a partir de la hidrólisis enzimática con lipasas. El indicador es una quinoneimina formada por hidrógeno-peróxido, 4-aminofenazono y 4- clorofenol, bajo la influencia catalítica de peroxidasa.

Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. La muestra debe ser extraida después de 12 a 14 horas de ayuno.

ÁCIDO ÚRICO

El ácido úrico se convierte, catalizado por la uricasa, en alantoina y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado, catalizado por la peroxidasa, oxida el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la  4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina rojo-violeta.

Suero, plasma heparinizado, o EDTA-Plasma y orina. Diluir la orina 1+10 con agua destilada.

Producto del catabolismo de las purinas, con excreción mayor en riñon y menor en tracto intestinal.

Niveles elevados en caso de gota, alteraciones renales, deshidratación, tratamiento con diuréticos.

UREA

La urea se hidroliza en presencia de agua y ureasa para formar amoníaco y dióxido de carbono. El amoníaco producido en la primera reacción se combina con Ι-oxoglutarato y NADH en presencia de glutamato-deshidrogenasa para producir glutamato y NAD+.

Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina. Diluir la orina 1 + 20 con agua destilada. Multiplicar el resultado por 21. La urea es estable en suero/plasma durante 1 día +25°C, 3 días entre +2 y +8°C ó 3 meses a -20°C. La urea es estable en la orina durante 4 días cuando se conserva entre +2 y +8°C.

Producto final del metabolismo proteico, sintetizada por el hígado → sistema sanguíneo→ Excreción en riñón.

Determinado mediante nitrógeno ureico.

Niveles altos: Deshidratación,

CREATININA

El amoniaco endógeno presente en la muestra se elimina por la presencia de la GLDH antes de añadir la creatinina deaminasa. La disminución de la absorbancia a 340 nm producida por la oxidación de NADPH, es proporcional a la concentración de amoniaco eliminado por la creatinina.

Suero, plasma heparinizado o EDTA.

Orina: diluida 1 + 49 con agua bidestilada.

Formada a partir de creatina hidrilizada por acción del fosfato de creatina como resultado del proceso de contracción muscular, el 2% de dicha sustancia se convierte en creatinina diariamente. Excretada principalmente por los riñones y poco por las heces. Depende de la masa muscular y su eliminación por los riñones.

BILIRRUBINA

La bilirrubina directa (conjugada) reacciona con ácido sulfanílico diazotado en medio alcalino formando un complejo azulado. La Bilirrubina Total se determina en presencia de cafeína, que elimina albúmina vinculada a la bilirrubina, mediante la reacción con ácido sulfanílico diazotado.

Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma son las muestras preferidas. Las muestras se deberán usar y conservar alejadas de la luz directa. Evitar la hemólisis ya que interfiere con el análisis.

Resulta de la roptura de la hemoglobina por la destrucción de globulos rojos, removida por el hígado y excretada por la bilis.

Aumenta en enfermedad hepática o por destrucción de eritrocitos.

-conjugada direca (hemólisis)

no conjugada indirecta (daño hepático)

TGO

La aspartato aminotransferasa (AST o GOT) cataliza la transferencia del grupo amino del aspartato al 2-oxoglutarato, formando oxalacetato y glutamato. La concentración catalítica se determina, empleando la reacción acoplada de la malato deshidrogenasa (MDH), a partir de la velocidad de desaparición del NADH, medido a 340 nm

Suero recogido mediante procedimientos estándar.

La aspartato aminotransferasa en suero es estable 7 días a 2-8ºC.

Enzima en hepatocito y mitocondria por lo que es bilocular, en epidermis de piel, musculo estriado, páncreas y riñones.

Etanol y hepatitis viral liberan TGO.

Útil para medir hepatitis crónica. Se eleva postinfarto. Se eleva en mononucleosis, anemia hemolítica e infección renal.

TGP

Los valores de alanina aminotransferasa se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de ciertas enfermedades hepáticas (p. ej., hepatitis viral y cirrosis) y cardíacas.

Suero o plasma heparinizado.

Se identifica en todo proceso inflamatorio necrótico del hígado y es empleada como screen en donadores de asngre para descargar hepatitis activa viral.

Enzima citoplasmática del hepatocito liberada en alteraciones celulares.

Eleva en hictericia viral

Eleva poco en hictericia de origen obstructivo.

Valores bajos en deficiencia de vitamina B6

PROTEÍNAS TOTALES

La proteína presente en la muestra reacciona con los iones cobre (II) en medio alcalino, originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría.

Suero y plasma heparinizado recogido mediante procedimientos estándar.. Estable 8 días a 2-8ºC.Los anticoagulantes quelantes interfieren.

Albumina: Regula presión osmótica coliodal de la sangre, aporta nutrición celular, interviene en el equilibrio ácido base, transporta lípidos formando lipoproteínas.

Globulina: Representa mas de la mitad de proteínas presentes en el suero.

Albumina  a menos del 3% se consideran hipoalbumineicos.

Causada por una disminución en síntesis proteica, mala alimentación o cirrosis,

FOSFATASA ACIDA

La fosfatasa ácida (FAC) cataliza en medio ácido la hidrólisis del α-naftil fosfato. El α-naftol producido reacciona con una sal de diazonio (Fast Red TR) formando un cromógeno. La actividad catalítica se determina a partir de la velocidad de formación de dicho cromógeno medido a 405 nm. El pentanodiol acelera la reacción al actuar como aceptor del fosfato. El tartrato se utiliza como inhibidor específico de la denominada fracción prostática.

Suero. La muestra se estabiliza añadiendo una gota de ácido acético (estabilizador 4) a 1 ml de suero. Es estable durante 3 días entre +2 y +8°C ó 24 horas entre +15 y +25°C.

Grupo de fosfatasa no especifica que cataliza la hidrólisis de un monoester o-fosfórico dando un alcohol yn nuevo ester-p!

Originado en el hígado.

Fosfatasa ácida prostática es una de las principales isoenzimas identificadas.

FOSFATASA ALCALINA

Las fosfatasas alcalinas (FAL) catalizan la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato (p-NFF) con la formación de p-nitrofenol y fosfato inorgánico, actuando el tampón alcalino como aceptor del grupo fosfato.  La reacción se controla cinéticamente a 405 nm a partir de la velocidad de formación del p-nitrofenol, proporcional a la actividad FAL presente en la muestra.

Suero o plasma heparinizado. Las muestras son estables durante 5 días cuando se conservan entre +2 y +8°C.

Se eleva en enfermedad ósea y en enfermedad hepática por osbtrucci´n del tracto biliar.

ANTIESTREPTOLISINAS

La anti-estreptolisina O (ASO) sérica con 200 UI/mL o valores mayores, provoca una aglutinación de las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O.

Suero recogido mediante procedimientos estándard. La anti-estreptolisina O en suero es estable 7 días a 2-8°C.

FACTOR REUMATOIDE

Los factores reumatoideos (FR) séricos provocan una aglutinación de las partículas de látex recubiertas con gamma-globulina humana.

Suero recogido mediante procedimientos estándard. Los FR en suero son estables 2 días a 2-8°C.

Inmunoglobulina G, A o M producido contra la fracción del antígeno IgG.

Presente en el suero.

PROTEÍNA C REACTIVA

La proteína C-reactiva (PCR) sérica con 6 mg/L o concentraciones mas elevadas, provoca una aglutinación de las partículas de látex recubiertas con anti-proteina C reactiva

Suero recogido mediante procedimientos estándar. La PCR en suero es estable 7 días a 2-8°C.

Su aumento indica un proceso inflamatorio, Útil para valorar la ineficacia de un tratamiento en casos de meningitis.

Constante en Artritis y fiebre reumatoide y en meningitis bacteriana pero no en la vírica.