Practica Enzimas

PRACTICA NO.1 DETERMINACION CUALITATIVA DE ALGUNAS ENZIMAS

Objetivo: ilustrar la especificidad de algunas enzimas y de qué forma es aprovechada para permitirnos su identificación en una muestra cruda.

INTRODUCCIÓN

La peroxidasa es una enzima que cataliza la oxidación de ciertos compuestos dadores de hidrógeno, como fenoles (guayacol, pirogalol) y aminas aromáticas (o-fenilendiamina) por medio de peróxidos ( ). El substrato oxidable más usado es el guayacol, que es oxidado a un complejo coloreado de tetraguayacol en presencia de peroxidasa:

La velocidad de formación del color rojo ladrillo puede ser utilizada como medida de la actividad enzimática por lecturas espectrofotométricas de las absorbancias en relación con el tiempo.

La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y cataliza la reacción de descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.

El peróxido de hidrógeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos organismos, pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima catalasa.

Además, la catalasa cumple una función protectora contra determinados microorganismos patógenos, sobre todo anaerobio.

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea a dióxido de carbono y amoniaco. Se encuentra principalmente en semillas, microorganismos e invertebrados. En las plantas, la ureasa es un hexámero –consiste en seis cadenas idénticas- y se encuentra en el citoplasma. En bacteria, consiste en dos o tres subunidades diferentes. Para su activación, la ureasa necesita unir dos iones de níquel por subunidad.

MATERIALES Y APARATO

• 1 gradilla

• 10mtubos de ensayo

• 1 vaso de precipitado de 400ml

• 3 pipetas graduadas de 5ml

• 3 pipetas graduadas de 1ml

• 1 soporte universal

• 1 anillo de acero

• 1 tela de asbesto

• 1 mechero

• 1 mortero con pistilo

Reactivos

• H2O2 al 3%

• Guayacol al 1% en etanol

• Peróxido de Hidrogeno al 3%

• Cristales de Urea

• Agua Des ionizada

• Rojo

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