Gerente

bjetivos específicos

• Determinar la velocidad de crecimiento radial y biomasa de las cepas F. Culmorum, T. harzianum y N. sitophila.

• Evaluar el contenido de proteína, glucanos, y glicógeno celular de las cepas de hongos filamentosos desarrollados en FMS

• Evaluar la actividad enzimática intracelular y extracelular de esterasas.

• Determinar la concentración de azucares reductores.

• Determinar patrones zimográficos de esterasas.

MATRIALES Y MÉTODOS

Organismos y condiciones del medio de cultivo

Las cepas a utilizar serán F. culmorum, T. harzianum y Neurospora sitophila, todas obtenidas del cepario del Centro de Investigaciones en Ciencias Biológicas (CICB) de la Universidad Autónoma de Tlaxcala. Posteriormete se preparará un medio que contenga (en g/L): glucosa, 10; extracto de levadura, 5; + sales minerales (composición en g/l; KH2PO4, 0.5; MgSO4.7H2O, 0.5; CaH4 (PO4).H2O, 0.3; FeSO4.7H2O, 0.2; ZnSP4.7H2O, 0.2; MnSO4.H2O, 0.2) (SM) y 2) g/l, (Sánchez y Cols., 2009). El pH será ajustado a 8.5 con NaOH 0.1M, 1M, 3M. El inoculo para cada matraz de fermentación, será de tres fragmentos de micelio (4mm de diámetro) tomados de la periferia de una colonia crecida sobre agar extracto de papa (PDA) a 20°C durante 7 días. La FS se llevará a cabo en matraces de 250 mL con 0.5 g de espuma de poliuretano (PUF; 17 kg m-3) en cubos (0.5 x 0.5 x 0.5 cm) (Diaz-Godinez y cols. 2001) como soporte inerte, impregnado con 15 mL del medio de cultivo estéril. Previamente los cubos serán lavados dos veces con agua destilada, secados en horno a 40°C por 24 h y puestos en autoclave a 120°C por 15 min para su esterilización. Los cultivos serán incubados por 15 días a 20°C.

Evaluación de la biomasa y velocidad específica de crecimiento

Durante las primeras 24 h. los hongos se desarrollarán en el medio previamente establecido. Posteriormente se obtendrá el extracto crudo enzimático (ECE) cada 12 h por filtración y retención de la biomasa a través de papel filtro Whatman No. 4. Con tres repeticiones, una vez que se encuentre retenida la biomasa sobre el papel Whatman se secará hasta obtener un peso constante para realizar su cuantificación por diferencia de peso seco (AOAC, 1990).

El progreso de la biomasa en función del tiempo X = X (t) se ajustará mediante la ecuación logística de Velhurst-Pearl:

dX / dt = µ (1-X / Xmax) X

La solución a la ecuación será la siguiente:

X = Xmax / (1 + Ce -µt)

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