PROGRAMA OPERATIVO ESTANDARIZADO

GLUCOSA

OBJETIVO Cuantificar la concentración de Glucosa en suero

ALCANCE Pacientes internados y ambulatorios del hospital

RESPONSABILIDAD Bioquímicos y técnicos del laboratorio

FUNDAMENTOS La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa (GOD), a ácido glucónico y peróxido de hidrógeno; el peróxido de hidrógeno formado, reacciona bajo la influencia de la peroxidasa (PAP) con fenol y 4-aminofenazona para formar un complejo rojo cereza de quinona, el cual presenta un máximo de absorbancia a 505 nm. La intensidad del color es proporcional a la concentración de glucosa.

APLICACIÓN La determinación de glucosa en suero es importante para el diagnóstico y monitorización de la diabetes mellitus, así como de otras patologías como la hipoglicemia, pancreatitis, problemas renales, etc.

MÉTODO Enzimático: Glucosa oxidasa peroxidasa (Wiener).

REACCIÓN Glucosa + O2 + H2O GOD Acido glucónico + H2O2

2 H2O2 + Fenol 4-Aminofenazona POD Complejo quinona + 4 H2O

MUESTRA Suero o plasma en ayuno de 8 horas como mínimo. y las 12 como máximo.

REACTIVOS Estándar de glucosa 100 mg/dl

Enzimas: glucosa oxidasa , peroxidasa y 4-aminofenazona

Buffer: Contiene: GOD, POD, 4-AF, Fosfatos Hidroxibenzoato

Precauciones.

Es para uso IN VITRO

Estabilidad.

El reactivo es estable a temperaturas de 2-10 ºC hasta la fecha de vencimiento.

No congelar. El reactivo es estable hasta 60 días a partir de su preparación.

MATERIALES Pipetas de 1, 2, 5 ml

Gradillas

Micropipeta de 10 µl

Punteras descartables

Propipeta

Tubos de ensayo de química

Un frasco con detergente para desecho de material utilizado.

EQUIPOS Centrífuga

Stat Fax 1904 plus

Baño María a 37ºC

Agitador vortex , cronometro

CONDICIONES DE REACCIÓN Longitud de onda 505 nm.

Temperatura de reacción 37ºC.

Tiempo de reacción 10 minutos.

Estabilidad de la reacción final 30 min.

Reactivo de trabajo duración 60 días a 2-10ºC.

Muestra no debe estar hemolizada.

PROCEDIMIENTO Llevar los reactivos y muestras de suero a temperatura ambiente, por los menos 20 minutos antes de su uso.

Se toman tres tubos de ensayo y se llevan a Baño María seco a 37ºC

B ST D

Standard 10l

Muestra 10l

Reactivo de Trabajo 1 ml, 1 ml, 1 ml.

Incubar 10 min. en baño maría seco a 37ºC

Leer en el Stat Fax auxiliar 13 a 505nm previamente llevando a cero el equipo con el blanco de reactivo.

CÁLCULOS Glucosa mg/dl = D x F F= 100mg/dl

St

Valores de Referencia.

Rango normal mg/dl.

Linealidad. La reacción es lineal hasta 450 mg/dl, cuando hayan resultados mayores a éste se deben realizar diluciones 1:2. La solución coloreada final con el reactivo de trabajo y repetir la lectura multiplicando el resultado final por 2.

CONTROL DE CALIDAD.

Se deben incluir sueros controles en cada corrida analítica, midiendo precisión y exactitud.

Participar periódicamente en los controles de calidad externa ya sea bimestral o anual.

LIMITACIONES. Evitar contaminaciones de reductores u oxidantes.

Los detergentes, metales pesados y cianuros son inhibidores enzimáticos.

...