Succinato- Introducción
Enviado por Vanesa Cx • 16 de Abril de 2016 • Resúmenes • 529 Palabras (3 Páginas) • 315 Visitas
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Introducción
La succinato deshidrogenasa cataliza la reacción e oxidación del succinato a fumarato, una enzima complejo que se halla estrechamente unido a la membrana. La succinato deshidrogenasa está conformada por cuatro subunidades, una que contiene el sitio de fijación de sustrato (FAD unido covalentemente a un residuo de histidina) y una que contiene tres centros ferrosulfurados (hierro no hemo) más dos proteínas hidrófobas pequeñas. Esta enzima es un ejemplo típico de flavo proteína en la que electrones y protones se transfieren desde el sustrato, el succinato, a través del FAD unido covalentemente y los centros ferrosulfurados en los que el hierro no hemo experimenta oxidación y reducción. Los electrones se tranfieren finalmente a la coenzima Q para, a continuación, ser transportados por la cadena transportadora de electrones. La succinato deshidrogenasa es fuertemente inhibida por el malonato y el oxaloacetato, y es activada por el ATP, Pi y succinato. El malonato inhibe a la succinato deshidrogenasa en forma competitiva con respecto al succinato, debido al gran parecido estructural entre el malonato y el succinato. (M. Devlin Thómas, 2006).
La cadena de transporte de electrones de Escherichia coli está compuesta por diferentes deshidrogenasas y reductasas terminales (u oxidasas) las cuales están ligadas por quinonas (ubiquinonas, manaquinona y demetilmenaquinona). No cuenta con la enzima citocromo c oxidoreductasa (complejo bc1). (G Unden, J Bongaerts; Volumen 1320, 4 de Julio 1997)
La formación de succinato deshidrogenasa en E. coli es controlada por condiciones ambientales. Su represión por glucosa es otro ejemplo de una enzima sujeta a represión catabólica. (Magasanik, 1961).
Método de Ells
La adición de metosulfonato de fenazina a un sistema que contiene succinato, diclorofenol indifenol, y succinato deshidrogenasa soluble causa una rápida decoloración del colorante de indofenol. La tasa de reducción es proporcional a la cantidad de enzima agregada.
Objetivo
Con base al crecimiento y a la actividad enzimática obtenidos bajo diferentes condiciones d cultivo, el alumno analizará los resultados obtenidos concluyendo cuál es el papel fisiológico de la enzima en Escherichia coli.
Hipótesis
Si se crece la cepa de E. coli en una fuente de carbono continua de succinato (succinato-succinato), entonces se inducirá la síntesis y activación de la enzima succinato deshidrogenasa.
La adición de otra fuente de carbono, la glucosa, inhibirá o disminuirá la actividad de la succinato deshidrogenasa.
El crecimiento de la cepa será mayor en aquellas condiciones en las que la fuente de carbono proporcione un mayor número e intermediarios biosintéticos y mayor cantidad de aporte energético y que, en general, sea fácilmente asimilable, así como que ésta sea continua, de lo contrario se espera la presencia de una diauxia en el crecimiento bacteriano.
Resultados:
- Efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de Escherichia coli
Tabla 1. Efecto de fuente de carbono en Escherichia coli
Cultivos previos en: | Matraces con medio base | + Fuente de carbono | Crecimiento | Crecimiento | |
Inicial | Final | Δ absorbencia | |||
Succinato | 1 | Succinato | 0.791 | 1.165 | 0.374 |
2 | Glucosa | 0.798 | 1.393 | 0.595 | |
Glucosa | 3 | Succinato | 0.887 | 1.298 | 0.411 |
4 | Glucosa | 0.881 | 1.487 | 0.606 |
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Grafica 1. Efecto de fuente de carbono en Escherichia coli
- Efecto de la fuente de carbono en la actividad de Succinato deshidrogenasa
Tabla 2.Efecto de la fuente de carbono en la actividad de Succinato deshidrogenasa
Tiempo (seg) | % de transmitancia a 600nm de las suspensiones celulares crecidas en las fuentes de carbono | |||
1. Succinato/Succinato | 2. Succinato/glucosa | 3. glucosa/Succinato | 4. glucosa/glucosa | |
0 | 4.1 | 4.2 | 5.6 | 4.5 |
30 | 4.1 | 4.7 | 5.9 | 4.7 |
60 | 4.2 | 5.2 | 6.0 | 4.6 |
90 | 4.2 | 5.6 | 6.4 | 4.6 |
120 | 4.3 | 5.9 | 6.6 | 4.6 |
150 | 4.3 | 6.2 | 6.7 | 4.6 |
180 | 4.3 | 6.4 | 6.9 | 4.6 |
210 | 4.3 | 6.6 | 7 | 4.6 |
240 | 4.2 | 6.9 | 7.1 | 4.6 |
270 | 4.2 | 7.1 | 7.2 | 4.6 |
300 | 4.1 | 7.4 | 7.3 | 4.6 |
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