Técnicas De Aglutinacion Precipitacion Y Elisa

TECNICA DE :

AGLUTINJACION

PRECIPITACION

ELISA

TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN:

TECNICAS DE AGLUTINACION

Son útiles para la detección de antígenos y anticuerpos. Su fundamento es inducir una agrupación microscópicamente visible de partículas, causada por interacciones antígeno anticuerpo que forman puentes entre ellas.

Usualmente el antígeno se encuentra en las partículas y los anticuerpos forman puentes. Existen varios tipos de aglutinación en donde se destacan:

TIPO CARACTERISTICA EJEMPLO TECNICA

Aglutinación activa:). anticuerpos dirigidos contra componentes de las partículas (eritrocitos, bacterias Un ejemplo de este caso es la determinación de grupos sanguíneos

Aglutinación pasiva). : los anticuerpos se dirigen contra moléculas que se han adherido intencionalmente a una partícula que actúa como medio de soporte pasivo (látex

TECNICA DE PRECIPITACION

Uno de los primeros descubrimientos acerca de la reacción antígeno-anticuerpo fue su capacidad para dar lugar a precipitados cuando se combinan en proporciones iguales o próximas al punto de equivalencia.

Cuando estas reacciones se llevan a cabo en geles de agarosa es posible probar diversos antígenos en una sola muestra de suero.

TIPO CARACTERISTICA TECNICA

Inmunodifusión en gel: se enfrentan antígenos y anticuerpos colocándolos en hoyos o pozos circulares adyacentes hechos en la agarosa, para que se formen líneas de precipitación entre ellos.

Inmunoelectroforesis: Algunas mezclas de antígenos son muy complejas como para ser analizadas por difusión y precipitación simples, por lo que fue necesario desarrollar este método, que consiste en separar los antígenos según su carga eléctrica y visualizarlos después por precipitación

Inmunodifusión radial: Para cuantificar se incorpora al gel cierta cantidad de de los anticuerpos correspondientes, con lo que al aplicar la muestra al hoyo y dejarla difundir libremente, se forma un precipitado circular, en forma radial

El diámetro del círculo del precipitado guarda proporción con la cantidad de antígeno en la muestra. De esta forma, se puede establecer una curva de referencia o calibración con cantidades conocidas del antígeno e interpolar los valores de las muestras desconocidas.

TECNICA DE ELISA

Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometría el antígeno en la muestra.

Las 4 fases de un ensayo ELISA son las siguientes:

Conjugacion del anticuerpo o del antígeno con un enzima (peroxidasa, fosfatasa alcalina...). El anticuerpo conjugado a la enzima se emplea en los ensayos directos e indirectos, sandwich, etc. El antígeno marcado se emplea en ensayos de competición de antígeno. Dicha unión anticuerpo-enzima o antígeno-enzima ha de producirse durante un determinado periodo de tiempo en aras de producir una solución coloreada y que pueda ser valorada

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