ACCION DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE DIVERSOS SUSTRATOS

ACCION DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE DIVERSOS SUSTRATOS

• DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS

Las pruebas de hidrolisis y fermentación de carbohidratos son muy importantes para la identificación de las bacterias. Los medios, para estudiar la degradación de estos compuestos, se preparan por lo general añadiendo 0.5% del carbohidrato (1% si es la lactosa) a un medio básico carbohidrato. Para detectar si hubo actividad enzimática se analiza la aparición de productos o la desaparición del sustrato. Entre los productos tenemos a los ácidos, cuya producción se indica con un indicador acido básico, tal como rojo de fenol, purpura de bromocresol, o azul de bromo timol. Los carbohidratos diferenciales más comúnmente usados son la glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa, xilosa, arabinosa, manitol, almidón, insulina y salicina.

• HIDROLISIS DEL ALMIDON

La hidrólisis del almidón se puede ensayar sobre medios líquidos o sólidos. Los medios solidos se siembran haciendo una estría radial o sembrando la superficie en botón.

OBJETIVO. - Demostrar que el almidón es hidrolizado por las enzimas α amilasa o β amilasa.

MATERIALES. –

Placa con agar almidón

Solución del Lugol (Yodo al 1%)

Cultivo de microorganismos de:

Bacillus subtills

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

PROCEDIMIENTO. -

1. Dividir la placa de agar almidón en tres sectores.
2. Marque e inocule (con aguja de kolle, una estría radial) la superficie del agar.
3. Incubar a 37°C por 24 horas a 72 horas.
4. Después del tiempo de incubación cubrir la placa con la solución Iodada y eliminar el exceso.

RESULTADO. – Considerar la prueba positiva, cuando el medio en contacto con el Iodo forma una aureola transparente o color marrón rojizo alrededor de la colonia

• FERMENTACION DE AZUCARES

OBJETIVO. – Estudiar algunas bacterias que son capaces de utilizar una serie de carbohidratos con producción de ácidos y gas.

MATERIALES. –

Tubos con agar Kliger TSI

Cultivo de microorganismos de:

• Escherichia coli
• Proteus vulgaris
• Serratia marcecens

PROCEDIMIENTO. –

1. Con aguja de Kolle inocular por picadura central profunda y por estría en superficie
2. Incubar los tubos a 37°C por 24 horas.
3. Hacer lectura de los medios en la forma siguiente:
4. El cambio de color del medio del cultivo rojo a amarillo en la superficie, indica fermentación de LACTOSA.
5. El cambio de color en profundidad indica fermentación de GLUCOSA.
6. Si hay producción de gas aparecerá ruptura del medio
7. Anote sus resultados e interprete

• PRUEBA DE EIJMAN

OBJETIVO. – Determinar el grupo coliforme, mediante el uso de una prueba específica (fermentación de lactosa)

MATERIALES. –

Tubos con caldo lactosado, billis verde brillante (con campana de Durham)

Cultivo de microorganismos de:

• Escherichia coli
• Bacillus subtilis

PROCEDIMIENTO. –

1. Inocular los tubos del medio de cultivo con el asa de Kolle
2. Incubar en un baño María a 44°C por 40 horas.
3. Hacer la lectura respectiva:
4. Considerar la prueba positiva cuando en las campanitas de Durham se observa presencia de gas, y si hay viraje de color amarillo indica acidez
5. Anotar sus resultados
6. Indique a que se denomina fermentación

• PRUEBA DE ROJO DE METILO

OBJETIVO. – Demostrar que algunos microorganismos al fermentar la glucosa producen y mantienen alta acidez, mientas que otros bajan inicialmente la acidez y después viran a la neutralidad.

MATERIALES. –

Medios de cultivo con caldo MR-VP.

Cultivo de microorganismos:

• Escherichia coli
• Stapphylococcus

PROCEDIMIENTO. –

1. Con el aza de kolle sembrar el medio respectivo.
2. Incubar el medio a 37°C por 72 horas.
3. Después del periodo de incubación añadir 5 gotas del reactivo de rojo de metilo al 0.04%

RESULTADO. – Considerar la prueba positiva cuando el medio mantiene un color rojo (microorganismo que producen y mantienen alta acidez), un color anaranjado se considera reacción intermedia y un color amarillo es una reacción negativa

• RACCCION VOGUES PROSKAUER

OBJETIVO. – Observar la producción de acemetil-metil carbinol a partir de la glucosa

MATERIAL. –

Tubos con caldo MR-VP

Cultivo de microorganismos:

• Escherichia coli
• Staphylococcus aureus

PROCEDIMIENTO. –

1. Con el asa de kolle inocular el medio MR-VP.
2. Incubar a 37°C por 5 días.
3. Después del tiempo de incubación añadir unos miligramos de creatina y 0.5 ml soda al 40%, agitar vigorosamente durante 2 minutos.

RESULTADO. –

Considerar la reacción como positiva si una coloración rojo carmín aparece al cabo de 10 minutos.

Anotar sus resultados.

• ACCION SOBRE LAS PROTEIAS Y OTRAS SUSTANCIAS NITROGENADAS

Para la demostración del metabolismo bacteriano sobre las proteínas, se realizarán las siguientes pruebas: hidrolisis de la gelatina, producción de indol, producción de indol, producción de H2S.

Otras sustancias nitrogenadas susceptibles de ser descompuestas por los microorganismos son la úrea y los nitratos.

• HIDROLISIS DE LA GELATINA

OBJETIVO. – Demostrar que debido a la acción de la enzima a gelatinas a un medio gelatinoso puede ser hidrolizado.

MATERIALES. –

Tubos con gelatina nutritiva

Cultivo de microorganismos:

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