ACIDOS NUCLEICOS

1. ¿Para qué sirve la electroforesis y cuál es su fundamento?

La electroforesis en gel es un método que se emplea para separar macromoléculas en función del tamaño, la carga eléctrica y otras propiedades físicas. La electroforesis en gel es una técnica consistente en aplicar corriente eléctrica a las moléculas para que atraviesen una placa de gel. La fuerza motriz de la electroforesis es la tensión eléctrica aplicada a los electrodos en ambos extremos del gel. Las propiedades de una molécula determinan la velocidad con que un campo eléctrico puede desplazarla a través de un medio gelatinoso.

Funciones: Se usa en una gran mayoría en la materia del DNA recombinante ya que nos permite saber la carga que poseen los polipéptidos, y separar los diferentes polipéptidos resultantes de las variaciones del experimento del DNA recombinante.

Fundamento de electroforesis:

La gran mayoría de macromoléculas están cargadas eléctricamente y, al igual que los electrolitos, se pueden clasificar en fuertes y débiles dependiendo de la constante de ionización de grupos ácidos y básicos. Por ejemplo los ácidos nucleicos son poliácidos fuertes.

Por lo general, para caracterizar la molécula se determina la velocidad a la que esta se mueve en un campo eléctrico y se utiliza para determinar, en el caso de proteínas, la masa molecular o para detectar cambios de aminoácidos y separar cuantitativamente distintas especies moleculares; en el caso de ácidos nucleicos se determina su tamaño, medido en pares de bases.

2. ¿Cómo se cuantifica el DNA y para qué sirve el índice 260/280?

El DNA se puede cuantificar directamente en soluciones acuosas, en forma diluida o sin diluir, midiendo la absorbancia A (o densidad óptica) de luz ultravioleta. Si la muestra es pura es decir, que no contenga cantidades significativas de contaminantes como proteínas, fenol, o agarosa, la medición espectrofotométrica de la irradiación ultravioleta absorbida por las bases es iónica resultan idóneos. La concentración de ácidos nucleicos suele determinarse midiendo a 260nm y comparando con un blanco. La interferencia de contaminantes puede determinarse calculando un “cociente”. Dado que las proteínas absorben a 280nm, se emplea el cociente A260/A280 para calcular la pureza de los ácidos nucleicos.

3. ¿Cómo saber si los ácidos nucleicos son de buena calidad e integridad?

Al no presentar signos de degradación o fragmentación, con un alto peso molecular y con una baja extracción de contaminantes.

Lopera Barrero Nelson M; Povh Jayme A; Ribeiro Ricardo P.; Gómez Patricia C; Jacometo Carolina B. Comparación de protocolos de extracción de ADN con muestras de aleta y larva de peces: extracción modificada

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