Actividad Enziamtica De La Fosfatasa Acida Prostatica

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

Integrantes:

Lara Zuñiga, Jorge Luis

Guerra Arzapalo, Paola Rossi

Orosco Napán, Julio Orosco

Reátegui Ochoa, Kevin

, Edis

Curso: Enzimología

Tema: Actividad Enzimática de Fosfatasa Acida Prostática

Profesora: Pilar Aliaga

Fecha: 19 de Abril de 2012

ACTIVIDAD DE FOSFATASA ACIDA PROSTATICA EN SUERO

Introducción

Quizá pocos saben, pero el cáncer de próstata es un proceso maligno extremadamente común, cuya incidencia en los hombres se encuentra en segundo lugar después del cáncer al pulmón. En 1990 se diagnosticaron unos 106.000 nuevos casos en los EE.UU., y unos 30.000 pacientes murieron como consecuencia de esta enfermedad. El carcinoma de próstata es poco frecuente en hombres menores de 50 años, pero a partir de esta edad aumenta en forma continua con cada década. El carcinoma de próstata es común en los EE.UU. y en gran parte de Europa Occidental, pero es mucho menos común en Asia. Los negros estadounidenses tienen la mayor incidencia de cáncer de próstata del mundo (7).

Es importante saber que las reacciones químicas en los sistemas biológicos sólo ocurren en presencia de catalizadores proteicos a los cuales conocemos con el nombre de enzima. Algunas enzimas se encuentran únicamente en tejidos específicos o en un número limitado de algunos tejidos, y algunas pueden servir como indicadores para la detección de problemas en la salud. De hecho, mas de 20 enzimas son usadas de manera común en el diagnostico de enfermedades en un laboratorio clínico (1).

Existe una enzima muy utilizada en la detección del cáncer a la próstata, que se encuentra dentro del grupo de fosfatasas ácidas (ACP). Este nombre es dado a todas las fosfatasas que tienen actividad óptima por debajo de un pH de 7.0. La presencia de fosfatasa ácida en suero proviene de varias fuentes que incluyen: los riñones, el hígado, el bazo, los eritrocitos, las plaquetas y la glándula prostática. Cada uno de éstos contribuye con isoenzimas de fosfatasa ácida que son específicas del órgano o células de origen (2). La fosfatasa ácida prostática es la de mayor interés clínico ya que grandes elevaciones de fosfatasa ácida se encuentran en casos de cáncer prostático con metástasis. Ya que la fosfatasa también se produce en otros tejidos, la isoenzima prostática se debe distinguir de la no-prostática para un diagnóstico seguro. Los niveles elevados de la fosfatasa ácida no-prostática se han observado en pacientes con enfermedad de Paget, hiperparatiroidismo con complicaciones esqueléticas y en cánceres en los cuales se encuentre invadido el hueso.

Si bien es cierto que un examen clínico normal en cuanto a próstata de refiere, con cifras no detectable, dan una amplia seguridad de normalidad prostática, sin embrago, esto no descarta un 100% al carcinoma. Se han descrito casos en que el carcinoma intracapsular existe y la fosfatas ácida prostática no demuestra alteraciones ni tampoco la ACP (8).

En esta práctica realizada se estimo la cantidad de fosfatasa ácida prostática presente en el suero de una muestra de sangre mediante la reacción que cataliza dicha enzima, ya que la cantidad de una enzima se determina midiendo la velocidad de reacción de la misma.

Fundamento:

Para determinar la actividad enzimática, se estimo a partir de la liberación de de fosfato inorgánico, proviniendo de un ester fosfato. Para tal experimento se puede usar cualquier ester fosfato, natural o artificial, debido a que la enzima no es de estricta especificidad (solo realiza catálisis con un solo sustrato) con respecto al sustrato.

El p-nitrofenil fosfato (sustrato usado) será usado ya que el producto de la hidrolisis y fácil de cuantificar, pero a su vez es muy especifico para la fosfatasa de origen prostático.

Reacción de la fosfatasa acida con el p-nitrofenil fosfato:

Cuando se libera los productos, se procederá a añadir NaOH para detener la reacción, formando así p-nitro- fenol, el cual se absorbe a 402nm. La concentración de producto (p-nitrofenolato) es proporcional a la actividad enzimática UE/L)

No obstante, la determinación del fostasa acida prostática también se desea obtener y para esto se utiliza L-tartrato, el cual inhibe la reacción de la fracción prostática (FA Prostatica), no interfiriendo así con la secuencia de la reacción.

Por ende la determinación de la actividad enzimática de la fosfatasa acida prostática, será a partir de la diferencia entre los dos ensayos con y sin L-tartrato.

Marco teórico

Las enzimas son proteínas que catalizan las reacciones químicas en los seres vivos. Las enzimas no hacen factibles las reacciones imposibles sino que, sencillamente, aceleran las que tendrían lugar de manera espontánea (aquéllas con un ΔG<0).

Como proteínas, poseen una conformación natural más estable y los cambios en esta conformación suelen ir asociados a cambios en la actividad catalítica. Las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH y temperatura, es por ello que existe un punto en su angosto rango en el cual la actividad catalítica será la más adecuada, estos son el pH óptimo y la temperatura óptima (4).

La actividad de las enzimas se mide por medio de la unidad de actividad enzimática (U) que es la cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 µmoles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los submúltiplos como el microkatal (µkat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat). La actividad específica es el número de unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg prot) o por mililitro de disolución (U/ml) (4).

La fosfatasa ácida (que actúa en medio ácido de pH óptimo

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