Análisis de resultados.

Análisis de resultados.

Los resultados obtenidos de actividad enzimática, pH y densidad óptica de las células inmovilizadas, nos indican si este método optimiza la obtención de la enzima deseada para nuestro proceso.

Al obtener los testigos (0.1mL DNS+0.1mL sobrenadante), los resultados de estos fueron mucho mayores a los de los demás tiempos, se hizo la observación de que en el sobrenadante se encontraba aún la enzima en contacto con el sustrato por lo que ésta continuo transformando a producto, y esto se vio reflejado claramente en la cuantificación del sustrato transformado en los testigos. Al considerar los testigos obtenidos, los valores de la actividad enzimática eran negativos, como se muestra en los gráficos 4.1-4.3, aunque también presentamos los datos sin considerar a los testigos, aquí se muestra un incremento de la actividad conforme pasa el tiempo a excepción de la última muestra tomada en donde vuelve  caer la actividad, ésta es una medida que no debe realizarse, por lo que se propone que para evitar este tipo de error, es  haber tomado una muestra antes de la inoculación del medio, es decir antes de la producción de la enzima y este podría ser considerado como nuestro testigo negativo. Otra opción sería realizar la purificación de la enzima mediante precipitación.

El incremento en la actividad enzimática, puede deberse a diferentes factores; Madigan y colaboradores (1997), afirman que gracias al incremento de la biomasa en el soporte, así como la concentración de nutrientes alrededor del soporte, permitirán que se presente este incremento. Varios estudios han demostrado que el metabolismo de las células inmovilizadas es mucho mayor en comparación al presentado por células libres (Polprasert et al., 1989) (Angelova et al., 2000) (Navarro y Durand, 1977).

En cuanto a los resultados de densidad óptica, estos nos dan una idea de la cantidad de biomasa presente en el medio, al inicio el incremento de absorbancia fue mínimo, casi despreciable, sin embargo ya para la última muestra (después de 18 horas) hay un notable aumento, esto lo interpretamos como que al encontrarse la esfera saturada de células, los poros de la esfera de abrieron permitiendo la salida de algunas de ellas lo que generó una mayor replicación de células afuera en el medio, esto también se pudo apreciar en la coloración de las esferas ya que al inicio de la cinética estas eran traslucidas y al final ya eran más oscuras y opacas. El incremento de la biomasa dentro del soporte puede atribuirse a que “tanto el soporte como la misma biopelícula que algunos de estos microorganismos forman, atrapan gran parte de los nutrientes y sustancias presentes en el medio, estos estarán más disponibles para las células inmovilizadas, que si estuvieran libres.”(Cohen, Y., 2001). El hecho de que algunas células salieran del soporte también se reflejó en la acidificación del medio, ya que en ese tiempo  alcanzó un pH de 5.

...