Biometria Hematica
Enviado por danira1 • 1 de Mayo de 2014 • 1.133 Palabras (5 Páginas) • 303 Visitas
BIOMETRIA HEMATICA
1.- DETERMINACION DE HEMOGLOBINA (Hb)
Es una proteína conjugada de color rojo integrantes de los eritrocitos entre un 31-34%. Existen varios métodos para determinación como hematina ácida, hematina alcalina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; éste último es el de elección por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado estándares de cianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en espectrofotómetro de uso común y corriente.
La sangre se hemoliza por agregado de un agente densoactivo, con el ferrocianuro de potasio se oxidan el átomo de fierro de ferroso a férrico para producir metahemoglobina. El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina. La cloración producida es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente.
Material:
o Tubos de ensayo de 13 x 100 ml
o Pipetas de 1ml
o Pipetas de Salí
o Boquillas
o Gradillas
o Gasa
o Celdas para espectrofotómetro
o Sangre capilar o venosa con anticoagulante.
Reactivos:
o EDTA al 10 % (.07 ml por .5 ml de sangre)
o Reactivo DE Drabkin:
o Ferrocianuro de potasio
o Cianuro de potasio
o Bicarbonato de potasio
o Solución estándar de cianometahemoglobina.
Procedimiento:
1.- En un tubo de ensayo, colocar 5 ml de reactivo de Drabkin
2.- Homogeneizar bien la sangre
3.- Llenar en sangre hasta la marca de la pipeta de Salhi
4.- Introducir la pipeta con sangre al tubo de ensayo y dejar caer la sangre, después mezclar bien la muestra.
5.- Se deja Reposar 10 min. Para la formación de cianometahemoglobina
6.- Calibrar primero el manómetro y después leer a 540 nanómetros en el espectrofotómetro contra un blanco de reactivo.
7.- comparar con la curva calibrada de estándares.
Valores de referencia:
Mujeres: 12 -14 gr/dl
Mujeres embarazadas: 11-14 gr/dl
Hombres: 13-19gr/dl
Recién nacidos: 13.19gr/dl
2.- DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO
Sencillo y exacto, y es importante determinar los indices eritrocitarios.
El hematocrito mide el porcentaje del volumen de sangre total pero, ocupada solamente por los eritrocitos
Material:
o Tubo de Wintrobe que tiene 11.5 cm de largo x 3 mm de luz (hueco). Para el micro se usa el tubo capilar)
o Pipeta Pasteur larga o Cánula
o Centrífuga
o Sangre capilar (micro) o venosa (macro) con anticoagulante
Procedimiento:
o Después de extraer la muestra de sangre se coloca en el tubo de ensayo con el anticoagulante.
o Homogenizar perfectamente la sangre haciendo girar el tubo.
o Utilizando la pipeta Pasteur o canula para llenar de sangre el tubo de Wintrobe exactamente hasta 10, no deben quedar burbujas de aire en el tubo
o Centrífuga a 3600 rpm. Durante 30 min.
o Ver resultado.
Valores de referencia:
H= 47 +- 2.5
M= 42+- 2.5
3.- CUENTA ERITROCITARIA
Consiste en diluir la sangre con el líquido de Hayem en una proporción exacta y luego examinar al microscopio una pequeña cantidad de la muestra colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación matemática se obtiene la cifra total.
Material:
o Tubos de ensayo de 13x100mm
o Pipetas de Thomas para glóbulos rojos
o Cámara de Neubauer
o Boquillas
o Microscopio
o Gasa
o Gradilla
o Sangre capilar o venosa con anticoagulante
Reactivos:
o EDTA (sal di sódica) al 10%
o Líquido de Hayem:
o Cloruro de mercurio 0.5 g
o Cloruro de sodio 1.0g
o Sulfato de sodio 5.0g
o Agua destilada 100ml
Procedimiento:
o llenar con sangre bien mezclada la pipeta de Thoma, hasta la marca 0.5. (Las pipetas están constituidas por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar inferior está dividido en 10 partes iguales con marcos de0.5 y 1.0.En el interior del bulbo existe una perlita de plástico (roja), para favorecer la mezcla de la sangre con el líquido y en el capilar superior hay una marca 101)
o Se limpia cuidadosamente
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