Biometría Hematica

Biometría hemática

Objetivo:

Determinar ciertos parámetros como lo son:

• HB

• HTO (porcentaje de la sangre que está compuesta por eritrocitos).

• Eritrocitos

• Índices eritrocitícos (VGN, HGM, CMHG).

• Leucocito

• Plaquetas

• Frotis diferencial

Fundamento:

La biometría hemática es un auxiliar en el diagnostico y seguimiento de anemias, leucemias, pacientes con quimioterapias, síndrome febril e infecciones. La biometría hemática también denominada hemograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que da información que de aquí se deriva i nos proporciona una idea muy confiable del estado general de salud del paciente.

Introducción:

La biometría hemática, también denominada citometría o citología hemática, es uno de los estudios de laboratorio que con más frecuencia se solicitan inicialmente tanto para los pacientes ambulatorios como para los hospitalizados. Es el primer examen al que se enfrenta el clínico en la valoración diagnóstica de un paciente, y aunque se considera como un solo examen de laboratorio, en realidad, valora el estudio de tres líneas celulares, cada una con funciones diferentes entre sí, pero que tienen en común que las produce

la médula ósea: eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Es un cuadro o fórmula sanguínea en el que se expresan el número, proporción y variaciones de los elementos sanguíneos.

Recoge:

1. Número de hematíes, hematocrito, hemoglobina e índices eritrocitarios

2. Recuento y fórmula leucocitaria

3. Número de plaquetas

Valores normales

• Hematíes (adultos)

o Mujeres: 4,2 - 5,4 millones/mm³ (En unidades SI: 4,2 - 5,4 x10¹²/L)

o Hombres: 4,6 - 6,2 millones/mm³ (En unidades SI: 4,6 - 6,2 x10¹²/L)

• Hemoglobina (adultos)

o Mujeres: 11,5 - 14,5 g/dL

o Hombres: 13,5 - 16,0 g/dL

• Hematocrito (adultos) Es la proporción entre los hematíes y el plasma sanguíneo

o Mujeres: 37 - 42%

o Hombres: 40 - 50%

• Índices eritrocitarios (adultos)

• Volumen corpuscular medio (VCM), se obtiene dividiendo el hematocrito entre el número de hematíes.

o Valores normales: 78 - 100 fL

• Hemoglobina corpuscular media (HCM), se obtiene dividiendo el valor de la hemoglobina entre el número de hematíes

o Valores normales: 27 - 32 pG

• Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM), se obtiene dividiendo el valor de la hemoglobina entre el hematocrito

o Valores normales: 30 - 35 g/dL

• Leucocitos:

o Valores normales: 4,5 - 10,5 mil/mm³ (En unidades SI: 4,5 - 10,5 x109/L).

Hemoglobina

(Hb)

Objetivos:

1.- Determinar la concentración de Hemoglobina que tiene un paciente.

2.- Aprender a realizar la técnica para la determinación de la hemoglobina con eficacia.

Fundamento:

El ferrocianuro de potasio convierte el hierro ferroso de la hemoglobina en hierro férrico, formándose la Metahemoglobina (compuesto inestable), el cual al combinarse con el cianuro de potasio, es capaz de formar la molécula cianohematoglobina (Compuesto estable), que se puede medir espectrofotometricamente.

Hemoglobina + Ferricianuro potásico  metahemoglobina

Metahemoglobina + Cianuro potásico  cianmetahemoglobina

Introducción:

La hemoglobina es el componente (pigmento) principal de los glóbulos rojos, eritrocitos o hematíes que sirve de vehículo para transporte de oxigeno y dióxido de carbono.

Esta es una proteína conjugada compuesta por una parte proteica (la globina) y el grupo prostético HEM (ferroprotoporfirina). La hemoglobina reducida esta compuesta por una molécula de globina y cuatro moléculas de HEM.

Su principal función es transportar el oxigeno desde los sitios donde la presión de este es alta (pulmones) hasta los sitios donde es baja (tejidos).

La hemoglobina es una de las pruebas frecuentes en los laboratorios de análisis clínicos, pero ninguno de los métodos habitualmente usados puede recomendarse por absoluta exactitud debido a la variedad de métodos y patrones.

ión: Determinación de hemoglobina: método de la cianmetahemoglobina

Material/ Equipo:

1.-Espectrofotómetro o fotocolorímetro: Estos instrumentos deben ser calibrados periódicamente mediante la solución patrón de HiCN, preparada de acuerdo a las especificaciones del International Committee for Standardization in Haematology (ICSH)

2.-Tubos: 12 x 100 mm.

3.-Sangre venosa total: anticoagulada con EDTA-K3 (1,5 mg/ml) o con heparina (10 UI/ml). Puede emplearse sangre capilar.

4.-Pipetas volumétricas: de vidrio y de 5 ml.

5.-Pipetas automáticas: de 20 l, debidamente calibradas.

6.-Reactivo de Cianmetahemoglobina:

Composición (pH 7-7,4)

Ferricianuro potásico [K3 Fe(CN) 6] 200 mg

Cianuro potásico [CNK] 50 mg

Fosfato monopotásico [KH2PO4] 140 mg

Detergente no iónico* 1 ml

Agua destilada hasta 1000 ml

Descripción de la técnica

Por un lado, se efectuará el espectro de absorción de la solución de referencia internacional y del reactivo de Drabkin en un rango de 400 a 700 nm (Fig.1).

Por otro lado se determinará la concentración de Hemoglobina de una muestra problema siguiendo los pasos detallados a continuación:

Conectar el espectrofotómetro.

Homogeneizar bien la sangre mediante agitación suave con un sistema automático (rodillos/disco giratorio) durante un tiempo mínimo de 5 min o manualmente por inversión del tubo 20 veces.

Pipetear 5 ml de reactivo de Drabkin en un tubo de ensayo limpio.

Mediante la micropipeta añadir 20 l de sangre homogeneizada al tubo que contiene 5 ml de reactivo de Drabkin. Al realizar esta operación, es fundamental eliminar el exceso de sangre que pueda quedar en las paredes externas del capilar antes de introducirlo en el reactivo y procurar asimismo que no quede sangre adherida a las paredes internas de la pipeta.

Agitar el tubo mediante inversión ( 4 o 5 veces) con el fin de conseguir homogeneizar bien la mezcla sangre-reactivo y esperar un mínimo de 5 min para que se produzca la hemólisis total y se complete la transformación de toda la hemoglobina en cianmetahemoglobina.

Leer la A de la solución a 540 nm, utilizando agua destilada como blanco.

Para calcular la concentración de hemoglobina es recomendable disponer de una curva de calibración (ver más adelante).

La concentración de hemoglobina también puede calcularse aplicando la siguiente fórmula:

Hemoglobina (g/l)= A540 (muestra) x HiCN patrón (mg/l x F

A540 (patrón) 1000

Siendo

A= absorbancia

F= factor de dilución de la sangre total en el reactivo de Van Kampen y Zylstra (251).

La concentración de hemoglobina en milimoles por litro de sangre (mmol/l) puede calcularse multiplicando el valor en g/l por 0,621.

Elaboración de la curva de calibración

La gráfica de calibración tiene como finalidad calibrar el espectrofotómetro para una lectura determinada calculando la corrección existente entre los valores de A leídos en el aparato y los correspondientes valores de concentración de hemoglobina.

Para trazar este gráfico se preparan 5 soluciones de concentración de HiCN conocida y decreciente a partir del patrón de HiCN mediante diluciones sucesivas en reactivo de cianmetahemoglobina (véase tabla

1).

Tubo Patrón de referencia de HiCN (ml) Reactivo de Drabkin (modificado)

(ml) Volumen final (ml) Dilución

(g/l) Hb

(g/l)*

1 3,0 0 3 0 145

2 1,5 1,5 3 1:2 72

3 1,0 2,0 3 1:3 48

4 0,5 2,5 3 1:6 24

5 0 3,0 3 0 0

* El valor de esta concentración dependerá del valor indicado en la ampolla del patrón de HiCN que se emplee en el Trabajo Práctico.

La concentración de hemoglobina correspondiente a cada tubo se determina a partir del grado de dilución y del valor indicado en la ampolla del patrón de HiCN. Una vez preparadas las soluciones patrón, se inicia la lectura a 540 nm del tubo que contiene sólo reactivo (tubo 5) y se ajusta la A (100% de transmitancia).

Luego, partiendo de la solución de HiCN más diluida (tubo 5) se leen las restantes soluciones patrón. Finalmente, la relación entre los valores de A obtenidos y los correspondientes de concentración de hemoglobina se representan en un gráfico con los valores de A en las coordenadas y la concentración de hemoglobina en las abscisas (Fig. 2).

Valores de referencia:

Sexo Valor mínimo Valor máximo

Hombre 13.8 17.2

Mujer 12.1 15.1

Unidades: g/dL (gramos por decilitro).

Bibliografía:

1. http://www.tuotromedico.com/temas/hemoglobina.htm

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